Aislamiento e identificación de las células fetales presentes al nacimiento en la circulación materna / Identification at delivery of fetal cells in the maternal circulation

RESUMEN

Introducción. El objetivo es presentar un modelo experimental para el aislamiento de las células fetales presentes en la circulación materna.Material y métodos. Se estudiaron a mujeres Rh negativo al final del evento obstétrico, recolectándose sangre venosa materna y del cordón umbilical del recién nacido. Se aislaron las células fetales en circulación materna mediante centrifugación con gradiente de separación, seguido de separación selectiva con perlas magnéticas marcadas anti-CD14 y anti-CD45, para posteriormente retirar los eritroblastos fetales con anti-CD71. A las células obtenidas en este último paso se les extrajo el ADN para amplificar mediante PCR, las regiones de los exones 4 y 5 de los genes RhD y RhCE. El fenotipo del Rh materno y neonatal se estableció mediante inmunohemaglutinación.Resultados. Se estudiaron 7 mujeres Rh negativo y sus respectivos hijos con fenotipo Rh positivo. De las células fetales aisladas se amplificaron en PCR dos bandas en electroforesis, una de 1 200 pares de bases (pb) para el gen RhD y otra de 600 pb para el gen RhCE. Los recién nacidos mostraron ambas bandas, mientras que las madres sólo presentaron la banda de 600 bp (Gen RhCE). Se obtuvo concordancia entre el fenotipo y el genotipo del RhD en 6 de 7 casos. En un caso no se obtuvo suficiente material celular para obtener ADN. Conclusión. Se muestra una estrategia que puede permitir el aislar células fetales de la circulación materna, abriendo una posibilidad de que posteriormente sea validado para el estudio del ADN mediante procedimientos sin riesgo fetal alguno.