Estrutura da cromatina e a fosforilaçäo da histona H1 durante o ciclo de vida e a diferenciaçäo do Trypanosoma cruzi / The chromatin structure and phosphorylation of histone H1 during the life cycle an differentiation of Trypanosoma cruzi

RESUMO

O cerne do nucleossomo, que forma a cromatina, é composto por duas de cada uma das quatro histonas MA, H2B, H3 e H4, formando uma estrutura cilíndrica, ao redor da qual 140 pares de bases de DNA se enrolam. Uma quinta histona, a histona Hl, associa-se ao nucleossomo nos pontos de entrada e saída do DNA, completando 2 voltas de DNA com mais 20 pares de bases, compactando a cromatina. Diferentes modificaçoes pós-traducionais das histonas modulam os efeitos do nucieossomo nos processos de transcriçao e replicaçao. A histona Hl é modificada por fosforilaçao durante o ciclo celular. Apesar de muitos estudos, nao se conhece ainda o papel da histona H 1 e nao se sabe como a fosforilaçao afeta a estrutura da cromatina. Neste trabalho, estudamos as modificaçoes pós-traducionais da histona H 1 durante o ciclo celular e diferenciaçao do Trypanosoma cruzi, o protozoário causador da doença de Chagas. Neste organismo a histona Hl nao possui o domínio globular. responsável pela interaçao com as histonas do cerne do nucleossomo, e a cromatina nao forma fibras de 30 rim. Para tal, as histonas foram extraídas com ácido e analisadas no sistema de eletroforese em gel de poli-acrilamida contendo Triton, ácido acético e uréia (TAU-PAGE), que separa as proteínas de acordo com seu grau de hidrofobicidade. Verificamos que o padrao das histonas do cerne é semelhante nos diferentes estágios do ciclo de vida do T. cruzi. Entretanto, observamos que as bandas correspondentes á histona Hl sao diferentes quando comparamos as formas replicativas (epimastigotas), com as nao replicativas (tripomastigotas) do parasita.. Nos tripomastigotas a maior parte da histona Hl é fosforilada, uma vez que é marcada com fósforo radioativo. Esta forma pode ser convertida na forma defosforilada, encontrada predominantemente nas formas epimastigotas, por tratamento com fosfatase alcalina. Quando formas epimastigotas sao tratadas com hidroxiuréia, que bloqueia o ciclo celular no inicio da fase S. a histona H1...(au)