Moléculas moduladas durante a inibiçäo de proliferaçäo de células mamárias murinas HC11 tratadas com 1, 25(OH)2D3 / Molecular targets involved in the antiproliferative effect of 1, 25(OH)2D3 in HC11 mouse mamary cells

RESUMO

A 1,25 dihidroxivitamina D3 (1,25(OH)2D3) é um hormônio esteróide relacionado com a homeostase do cálcio e envolvido com o controle da proliferaçao celular. Células mamárias murinas HC11 imortalizadas espontaneamente, retêm características de células normais e têm o crescimento inibido mediante exposiçao ao hormônio o qual se correlaciona com um aumento das células em GO/G1. Nosso objetivo foi verificar o efeito da 1,25(OH)2D3 (100nM, 72h) sobre moléculas específicas reguladoras do ciclo celular (ciclinas e inibidores de quinase dependente de ciclina (p21WAF1/C/P1 e p27KIP1) do estado de fosforilaçao da proteína de retinoblastoma (pRb), como sobre os genes de resposta imediata das famílias de c-myc, c jun e c-fos, sobre o fator transformante b (TGF b1, 2 e 3) e seus receptores (Tb RI e RII) e a proteína ligante 3 de IGF (IGF-BP3) através da expressao de RNAm, por ensaio de proteçao da ribonuclease, e de proteína, por análise de western blot e imunoprecipitaçao. As células HC11 expressam basicamente RNAm de c-myc e os de L-myc e B-myc estao praticamente ausentes. O tratamento nao alterou o nível da expressao destas moléculas se comparadas ao controle, e também nao modulou a expressao dos RNAm de max, mad, mxi, mad3 e mad4. Células HC11 apresentam principalmente RNAm de jun-B e Jun-D em relaçao a c-jun, e de fra-2, em relaçao a c-fos, fos-B e fra-1, e o hormônio nao regulou estes níveis de expressao. Detectamos nestas células um maior conteúdo de RNAm de TGFb1 e b3 se comparados com o de TGFb2, e também observamos a expressao dos receptores TbRI e RII. Sugerindo que estes genes nao estejam envolvidos nos efeitos inibitórios da 1,25(OH)2D3. Células HC11 exibem preferencialmente RNAm e proteína de ciclina D1 em relaçao a ciclinas D2 e D3. Apresentam ainda um grande conteúdo de RNAm de ciclinas A2, B1 e H. Os níveis de RNAm e de proteína destas ciclinas nao sao modulados pelo hormônio. Observamos também a expressao do RNAm de ciclina E, cujos níveis nao variaram em células induzidas com 1,25(OH)2D3, embora uma queda da expressao desta ciclina, após 72 h de cultura, independente do tratamento tenha sido verificada. Entretanto, a expressao protéica de ciclina E dobrou com o tratamento em comparaçao a células controle (72h), sugerindo que esta modulaçao ocorra a nível pós transcricional. Células induzidas apresentam também uma elevaçao do conteúdo protéico de p21WAFilclP1 (1,4 vezes) em relaçao a células...(au)