Nephrotoxicity of Bence-Jones Proteins: correlation with endocytosis by BHK cells and intracellular movement

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi avaliar a endocitose de duas proteínas de Bence Jones por células renais, com a finalidade de elucidar a interferência de características físico-químicas na nefrotoxicidade. As proteínas de Bence Jones (denominadas AK e GL) forma purificadas e isoladas da urina de dois pacientes com mieloma múltiplo. Isótopos de ambas as proteínas foram caracterizados como sendo cadeias leves lambda monoclonais humanas. AK, apresentou principalmente pI>7,0, alto conteúdo de galactose e baixo teor de moléculas de ácido siálico. Por outro lado, GL apresentou uma única banda com pI 4,3, maior teor de ácido siálico e baixo teor de galactose, em comparaçäo co AK. Células renais de hamster, BHK(Baby Hamster Kidney) foram mantidas em cultura à temperatura de 37§C, utilizando meio de cultura DMEM suplementado com 10 por cento de sooro fetal bovino, em pH 7,4. Quando confluentes, as células BHK foram incubadas com as duas proteínas dissolvidas em meio isento de soro, durante 1, 5, 15, 30, 60 minutos e 24 horas. Foi omitida a incubaçäo com proteínas de Bence Jones em células usadas como controle. Com o término da incubaçäo, as células foram lavadas, tripsinizadas, centrifugadas e fixadas em soluçäo de paraformaldeído 4, 0 por cento e glutaraldeído 0,5 por cento em tampäp fosfato 0,1M pH 7,4. A seguir, os pellets obtidos foram processados para microscopia e incluídos em LRWhite. Cortes semi-finos foram colhidos e submetidos a reaçöes imunocitoqumícas, utilizando proteína acoplada a ouro coloidal e intensificaçäo pela prata. A detecçäo da amrcaçäo foi avaliada em microscopia de luz. Os resultados mostraram q1ue a proteóna GL tendeu a ser direcionada para localizaçäo pewri-nuclear. Por outro lado, AK demonstrou um comportamento diferente. Os dados indicaram que houve uma contribuiçäo direta das características físico-químicas das proteínas no direcionamento intracelular