Padröes de expressäo e localizaçäo das família das proteínas do gene do retinoblastoma e do fator de transcriçäo E2F durante o desenvolvimento e diferenciaçäo celular da córnea: estudo in situ / Expression and localization patterns of retinoblastoma and E2F family proteins during corneal development and cell differentiation: in situ study

RESUMO

0 objetivo deste trabalho é determinar in situ os padroes de expressao e localizaçao das famílias do gene do retinoblastoma e do fator de transcriçao E2F nos epitélios corneano e limbar, bem como nos ceratócitos da córnea, durante seu desenvolvimento e diferenciaçao. E também correlacionar a localizaçao das proteínas reguladoras do ciclo celular com o estado de proliferaçao das células epiteliais e dos ceratócitos. Para este experimento foram preparadas secçoes por meio de criopreservaçao de córneas de ratos neonatos, jovens e adultos. As células epiteliais do limbo e da córnea, e os ceratócitos do estroma foram examinados e localizados por microscopia imunofluorescente indireta, usando anticorpos comerciais contra a proteína do retinoblastoma e seus membros familiares próximos, a proteína p107 e a p130; os membros da família dos fatores de transcriçao E2F; E2F-1, E2F-2, e E2F-4; e o antígeno de proliferaçao Ki67 um marcador de células que estao ativamente ciciando. A transcriçao reversa da reaçao em cadeia da polimerase foi usada para determinar se o ácido ribonucléico mensageiro para a proteína do retinoblastoma, a p107, a p130, o E2F-1, o E2F-2, o E2F-3, o E2F-4, e o E2F-5 estavam presentes no epitélio comeano adulto. 0 Ki67 foi localizado na camada basal corneana e no epitélio limbar com o maior número de células marcadas entre o décimo terceiro e o décimo nono dias. Alguns ceratócitos estromais foram marcados até o décimo nono dia, porém em maior número no segundo dia. Em córneas de adultos, nenhum Ki67 foi descoberto nos ceratócitos ou nas células suprabasais do epitélio. A análise da transcriçao reversa da reaçao em cadeia da polimerase indicou que o ácido ribonucléico mensageiro para todos os membros das famílias da pRb e do E2F estava presente no epitélio corneano adulto. A pRb e o E2F-2 foram localizados em todas as células das córneas neonatas, jovens e adultas, inclusive nas suprabasais do epitélio que sao terminalmente diferenciadas. A p130 exibiu uma localizaçao citoplásmica difusa até o período entre nove e 11...(au)