A ulceraçäo aftosa recorrente analisada por microarray de cDNA tem expressäo gênica de resposta imune do tipo Th1 / The recurrent aphtous ulceration analyzed by cDNA microarray has a Th1 gene expression profile

RESUMO

Objetivo: Identificar o padrão de expressão génica da Ulceração Aftosa Recorrente e classificar o tipo da resposta imune T-Helper a partir da comparação da expressão gênica da -doença com controle normal, usando a técnica de microarray de cDNA. Métodos: Vinte e nove pacientes portadores de ulceração aftosa recorrente (Grupo Teste), com pelo menos uma crise a cada quinze dias, foram submetidos, na fase aguda da doença, a biópsia da lesão ulcerada. Onze voluntários saudáveis (Grupo Controle), livres da doença, foram submetidos a biópsia de mucosa clinicamente normal. O RNA total das amostras foi isolado e dois pools de RNAs, representado os Grupos, foram formados, usando-se quantidades iguais do RNA de cada amostra. A sonda radioativa de cDNA foi preparada a partir de 17 gg do RNA total através da reação de transcrição reversa. As sondas foram hibridadas com as membranas de microarray em duplicata. As imagens dos microarrays hibridados foram obtidas por varredura realizada em scaner a laser. Os alvos de cDNAs, marcados nas membranas, foram localizados e quantificados usando-se sofiware específico. As normalizações dos pares de membranas foram executadas através do modelo linear de ajuste local, baseado no método de suavização conhecido como Lowess. Os genes foram considerados diferencialmente expressos quando o valor da média da diferença de expressão das membranas, entre Teste e Controle, era maior do 2x e, o valor da média de expressão gênita era maior do que o nível do gene controle negativo da membrana. Para analisar o padrão da resposta imune, foram selecionados, no microarray, genes associados com atividades Th1 (n=36) ou Th2 (n=19) e, as médias da diferença de expressão desses genes foram comparadas com a dos genes constitutivos (N=13). Resultados: Foram identificados vinte e um genes hiper-expressos e vinte Kipoexpressos no Grupo Teste. O nível médio de expressão dos genes Th1 no Grupo Teste foi maior (p<0,05) do que no Grupo Controle. Por outro lado, a média dos genes Th2 foi a mesma nos dois Grupos. Conclusões: O microarray de cDNA permitiu a identificação dos padrões gênitos da Ulceração Aftosa Recorrente e da mucosa controle e possibilitou classificar a Ulceração Aftosa Recorrente como doença Th1