Detecção de células em divisão no epitélio corneano com a utilização do marcador bromodeoxiuridina (BrdU) / Detection of cells in division in the corneal epithelium using bromodeoxyuridine (BrdU) marker

RESUMO

Objetivos: Avaliar a eficácia do marcador BrdU em detectar células em divisão no epitélio corneano de coelhas em três diferentes situações de proliferação celular. Local: Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo - SP. Material e Métodos: Quinze coelhas albinas da raça Nova Zelândia, espécie Oryctolagus cuniculus, tiveram seus olhos aleatoriamente divididos em 3 grupos. O grupo A (hipoproliferação) incluiu 10 olhos que foram submetidos à instilação de 5-Fluorouracil, 9mg/dia, topicamente; o grupo B (controle), instilação de tampão fosfato (total de 10 olhos) e grupo C (hiperproliferação), instilação de tampão fosfato após a remoção de uma área central do epitélio corneano de 10mm (total de 10 olhos). Após a realização do defeito epitelial central na córnea dos animais do grupo C, iniciou?se a instilação de colírio de 5-Fluorouracil nos olhos do grupo A e de tampão fosfato nos olhos do grupo B e C, na dosagem de uma gota a cada duas horas, por quatro dias. Realizou-se uma injeção na veia marginal da orelha de solução contendo 50mg/kg de peso de 5-Bromo-2Æ-Deoxiuridina (BrdU), diluído em 30,3mg/ml de fosfato esterilizado (PBS) com pH = 7,4, 15 horas antes do sacrifício. As córneas retiradas no quarto dia do experimento foram submetidas às técnicas imuno-histoquímicas para o marcador BrdU. Após a coloração, foram contadas o número total de células marcadas por cada 100 células basais, sob microscopia óptica e num aumento de 400 vezes. Resultados: A média de células marcadas (por 100 células basais) no grupo controle (B) foi de 7,17 (DP±0,74); no grupo com hiperproliferação (C), de 35,00 (DP±3,01); e no grupo com hipoproliferação (A), foi de 0,22 (DP±0,10). A análise de variância pelo teste de Kruskal-Wallis demonstrou que as diferenças intragrupo foram estatisticamente significativas (H = 25,88 e p < 0,00001*), resultado confirmado pela prova de Dunn. Conclusão: O uso do marcador BrdU permitiu detectar células em divisão em três diferentes situações de proliferação celular sem a utilização de marcadores radioativos.