Desarrollo de un método inmunoenzimático para determinar progesterona / Development of an immunoenzimatic method to determine progesterone

RESUMEN

Se desarrolló un método inmunoenzimático, competitivo, en fase líquida, con separación por anticuerpos acoplados a partículas magnetizables, para determinar progesterona en plasma; se basa en la competencia por los sitios de unión de un anticuerpo monoclonal, entre la hormona presente en la muestra y un conjugado hormona-enzima, en presencia de agentes bloqueadores de las proteínas de transporte de esteroides del plasma. El complejo antígeno-anticuerpo es atrapado por un segundo anticuerpo antiglobulina de ratón acoplado a partículas magnetizables que permite separarlo de los componentes no reaccionantes del sistema y desarrollar en su superficie la reacción de color con la que se cuantifica el analito. Este sistema no requiere extracción de los esteroides del plasma con solventes orgánicos, ni centrifugación y el producto final de la reacción puede ser leído en un colorímetro convencional. Todo lo anterior lo hace accesible al equipamiento de un laboratorio de bioquímica clínica convencional. Se estudiaron los parámetros de calibración y de calidad de ambos métodos, se compararon con 2 sistemas analíticos comerciales similares y con los resultados de la determinación de progesterona en 200 muestras y se comprobó que no existían diferencias estadísticas entre ellos. Se concluyó que este sistema cuenta con los requisitos necesarios para ser incorporado como método de rutina en los laboratorios del Sistema Nacional de Salud(AU)

ABSTRACT

An immunoenzimatic, competitive liquid stage method , with separation by antibodies coupled to magnetizable particles was developed to determine progesterone in plasma, It is based on the competence for the binding sites of a monoclonal antibody between the hormone present in the sample and a hormone-enzime conjugate in the presence of blocking agents of the proteins transporting steroids from plasma. The antigen-antibody complex is trapped by a second mouse antiglobulin antibody coupled to magnetizable particles that allow to separate it from the non reacting components of the system and to develop in its surface the color reaction with which the analyte is quantified. This system does not require either extraction of the steroids from plasma with organic solvents or centrifugation and the final product of the reaction may be read in a conventional colorimeter. All this make it accessible to the equipment of a laboratory of conventional clinical biochemistry. The parameters of calibration and quality of both methods were studied and compared with 2 similar commercial analytic systems and with the results of progesterone determination in 200 samples. It was proved that there were no statistical differences between them. It was concluded that this system has all the necessary requirements to be incorporated as a routine method in the laboratories of the National Health System(AU)