Recommendations for the detection of Leptospira in urine by PCR

RESUMO

No presente estudo, a PCR foi utilizada para detectar leptospiras em urina humana. Diversas abordagens para processamento de amostra foram avaliadas para otimizar a detecção de leptospiras em urina misturada com esta bactéria. Além disso, algumas mudanças na composição da mistura de reação foram analisadas. Não se observou amplificação em urina ácida, conseqüentemente, a neutralização da amostra imediatamente após a coleta é fortemente recomendada. PBS apresentou melhores resultados que Tris ou NaOH como reagentes neutralizadores. Congelamento e descongelamento de amostras antes do processamento produziram resultados negativos. Eliminação de células epiteliais, leucócitos e cristais por centrifugação a 3.000rpm, à temperatura ambiente, aumentou a sensibilidade. Ademais, ambas, a etapa de lavagem após a coleta de leptospiras por centrifugação e a inclusão de albumina de soro bovino a 0,1 por cento na mistura de reação minimizaram a interferência de outros compostos inibidores. Essas modificações contribuíram para melhorar a detecção de Leptospira em urina através da PCR.