Mapping of a Leishmania major gene/locus that confers pentamidine resistance by deletion and insertion of transposable element
Rev. Inst. Med. Trop. Säo Paulo
;
46(2): 109-112, Mar.-Apr. 2004. ilus, tab
Article
in English
| LILACS
| ID: lil-358071
RESUMO
A Pentamidina (PEN) é um composto alternativo para o tratamento de pacientes com leishmaniose que apresentam resistência ao antimônio, cujo alvo celular continua incerto. Uma abordagem para se identificar prováveis alvos seria a identificação e super-expressão de genes capazes de mediar resistência a PEN. A partir de uma genoteca construída com o DNA de Leishmania major em um vetor - cosmídio que se desenvolve tanto em bactérias como nas células do parasita, isolamos um locus que após transfecção é capaz de produzir resistência a PEN às células do parasita. Almejando o mapeamento desse locus de leishmania, o inserto clonado nesse cosmídio foi deletado através de duas digestões parciais sucessivas com enzimas de restrição, seguida de transfecção em células selvagens, super-expressão gênica, indução e testes funcionais na presença de PEN. Para determinar o gene de Leishmania relacionado com a resistência a PEN, o seqüenciamento de nucleotídeos foi executado após inserção de elementos transposicionais de Drosophila melanogaster no interior do inserto deletado para atuar como ilhas de iniciadores. Descrevemos aqui o mapeamento desse locus, após a inserção transposicional, que além de facilitar o seqüenciamento de nucleotídeos de grandes fragmentos de DNA, permite uma rápida identificação do gene relacionado com esse fenótipo. Experimentos posteriores revelaram neste locus a presença do gene de uma Glicoproteína-P de membrana, cujo papel no metabolismo na Leishmania está sendo analisado.
Full text:
Available
Index:
LILACS (Americas)
Main subject:
Pentamidine
/
Drug Resistance
/
DNA Transposable Elements
/
Leishmania major
/
Antiprotozoal Agents
Limits:
Animals
Language:
English
Journal:
Rev. Inst. Med. Trop. Säo Paulo
Journal subject:
Tropical Medicine
Year:
2004
Type:
Article
/
Project document
Affiliation country:
Brazil
Institution/Affiliation country:
Universidade de São Paulo/BR
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