Comparação de três protocolos de extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina / Comparison of three DNA extraction protocols from formaldehyde-fixed and paraffin-embedded tissues
J. bras. patol. med. lab
;
40(3): 141-146, maio-jun. 2004. ilus, tab
Article
in Portuguese
| LILACS
| ID: lil-362180
ABSTRACT
OBJETIVO:
Padronizar um método alternativo para extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e conservado em arquivos de blocos de parafina, visando à realização de estudos retrospectivos.MÉTODOS:
Comparou-se a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de tecido parafinado, para análise por reação em cadeia de polimerase (PCR), tomando-se como parâmetro um protocolo baseado em um kit comercial. Foram feitas extrações do DNA de 60 espécimes por trêsmétodos:
o protocolo A, baseado no kit GlassMAX; o B, utilizando-se o kit GFX TM; e o C, tendo como base o método de Banerjee et al.(2). A integridade e a suficiência do DNA presente na amostra foram avaliadas pela amplificação por PCR de um segmento de 110pb do gene da beta-globina humana, com visualização por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida, corado pela prata.Resultados:
Das 60 amostras analisadas, 45 apresentaram resultado positivo na PCR quando o DNA foi extraído por qualquer um dos três protocolos. Em seis amostras, a amplificação foi positiva apenas para o DNA extraído pelos protocolos A e C. Em três amostras, o resultado foi positivo apenas para o DNA extraído pelo protocolo A, e em duas, apenas para o DNA extraído pelo protocolo C.CONCLUSÕES:
O protocolo C apresentou desempenho semelhante ao do protocolo A, com as vantagens de apresentar menor custo, dispensar o uso de kit comercial, além de não utilizar solventes orgânicos, revelando-se uma alternativa viável para a obtenção de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina.
Full text:
Available
Index:
LILACS (Americas)
Main subject:
DNA
/
Polymerase Chain Reaction
/
Paraffin Embedding
/
Guidelines as Topic
/
Formaldehyde
Type of study:
Practice guideline
/
Observational study
Limits:
Humans
Language:
Portuguese
Journal:
J. bras. patol. med. lab
Journal subject:
Pathology
Year:
2004
Type:
Article
Affiliation country:
Brazil
Institution/Affiliation country:
Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer/BR
/
Universidade Federal do Rio Grande do Norte/BR
/
Universidade Federal do Rio de Janeiro/BR
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