Evaluation of the Image-Pro Plus 4.5 software for automatic counting of labeled nuclei by PCNA immunohistochemistry

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar uma macro (rotina informatizada) usando o programa Image-Pro Plus 4.5 (Media Cybernetics, Silver Spring, EUA) para a contagem automática de núcleos imunopositivos para o antígeno nuclear em célula proliferante (PCNA). Utilizamos 154 imagens microscópicas digitalizadas coloridas obtidas de onze cortes histológicos de líquen plano oral reticular processados por imuno-histoquímica para PCNA. Os parâmetros densidade média (nível de cinza), densidades de vermelho, de verde e de azul, área, eixo menor, taxa de perímetro e redondeza foram usados para a discriminação dos núcleos imunopositivos pela macro, que, no final do processo, apresentava estes núcleos delineados e contados na imagem estudada. A definição dos limites de corte para densidade média e área foi realizada automaticamente em função, respectivamente, da média da densidade e da média da área dos núcleos imunopositivos presentes em cada imagem. Para controle, foi realizado o delineamento manual dos núcleos imunopositivos sobre as imagens digitalizadas e sua contagem visual. A comparação entre os resultados das contagens da macro versus contagens do controle mostrou uma correlação estatística significativa (rs = 0,964, p < 0,001) e uma alta proporção (89,8 ± 3,8%) de núcleos imunopositivos contados coerentemente pela macro. Concluímos que os principais parâmetros associados com a alta correlação entre os resultados da macro e do controle foram os limites de corte para densidade média (nível de cinza) e área baseados no padrão das imagens. Além disso, a análise de imagem usando o Image-Pro Plus 4.5 com definição automática dos limites de corte para densidade média e área pode ser considerada uma alternativa válida para o método visual de contagem de núcleos imunopositivos para PCNA.