Optimizacion dela tecnica de PCR para el diagnostico de Shigella disenteriae utilizando una cepa pura / Tecnica optimization dela of PCR for I diagnose of Shigella disenteriae using a pure stock

RESUMEN

Las enfermedades diarreicas son responsables de la muerte de 5 millones de niños por año en países en vías de desarrollo. En Bolivia, una de las causas mas frecuentes de enfermedades diarreicas es la disentería bacilar. El diagnóstico microbiológico para dicha enfermedad, hasta ahora es realizado por métodos microbiológicos, los cuales requieren de Sa 5 días para obtener el resultado que permita dirigir al paciente a un tratamiento antimicrobiano adecuado. Es necesario introducir nuevas técnicas de diagnóstico mas rápidas y eficientes. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica molecular rápida de alta especificidad y sensibilidad en comparación a las anteriormente mencionadas tFrankel elaL 1990; Sethabutr el al. 1993; Yavzori et al. 1994) que sebasa en la amplificaciór del ácido desoxirobonucleico (ADN) bacteriano, permitiendo li detección de esta bacteria en menor tiempo que el cultivc microbiológico convencional y en muestras con baja carga bacteriana. En el presente trabajo se ha optimizado la técnicr de PCR para detección de Shigella spp, bajo nuestrar condiciones ambientales., En la etapa de extracción del DN de la bacteria sugiere una serie de condiciones entre las qu se puede destacar: velocidad centrifugación, volumen de PB a utilizarse, cantidad de muestra bacteriana tomada del cultivo Las condiciones determinadas para el aislamiento del DNJ bacteriano obtenido en este estudio sugiere una velocidad d centrifugación de 5000 rpm, un volumen de 300 iii de PB para la preparación de la suspensión bacteriana realizada cor 1 UFC, sin .embargo algunas características como l concentración del gel de agarosa, voltaje de corrida y el pH dc buifer de corrida no presentan modificaciones del protocoli original