Use of nonradioactive labeling to detect large gene rearrangements in 21-hydroxylase deficiency
Rev. Hosp. Clin. Fac. Med. Univ. Säo Paulo
;
59(6): 369-374, 2004. ilus
Article
in English
| LILACS
| ID: lil-391620
RESUMO
OBJETIVO:
Padronizar a técnica de Southern blotting usando hibridização com material não radioativo para detectar grandes rearranjos no gene CYP21A2 em uma amostra da população brasileira com hiperplasia adrenal congênita.MÉTODO:
Foram estudados 42 pacientes, 2 dos quais aparentados, totalizando 80 alelos não relacionados. As amostras de DNA foram obtidas de sangue periférico, digeridas com enzima de restrição Taq I, realizado Southern blotting e hibridizadas com sonda marcada com biotina.RESULTADOS:
O método se mostrou eficaz, com resultados similares aos encontrados ao utilizar a metodologia com material radioativo. Foram encontradas 2,5% de deleção do CYP21A2, 8,8% de grandes conversões, 3,8% de deleção do CYP21A1P e 6,3% de duplicação do CYP21A1P. Estas freqüências foram similares às encontradas em nosso estudo prévio, onde um número significante de casos foi estudado. Um bom padrão de hibridização foi alcançado utilizando menor quantidade de DNA (5mg) e a emissão de sinais foi observada entre 5 minutos e 1 hora de exposição.CONCLUSÕES:
Padronizamos uma técnica de Southern blotting/ hibridização com material não radioativo (biotina) para a pesquisa de grandes rearranjos no gene CYP21A2 com bons resultados. Apesar de ser mais trabalhoso, este método é mais rápido, utiliza menores quantidades de DNA e, principalmente, evita problemas com o uso de radioatividade.
Full text:
Available
Index:
LILACS (Americas)
Main subject:
Biotin
/
DNA
/
Gene Rearrangement
/
Blotting, Southern
/
Adrenal Hyperplasia, Congenital
/
Deoxycytosine Nucleotides
Type of study:
Evaluation studies
Limits:
Female
/
Humans
/
Male
Language:
English
Journal:
Rev. Hosp. Clin. Fac. Med. Univ. Säo Paulo
Journal subject:
Medicine
Year:
2004
Type:
Article
/
Project document
Affiliation country:
Brazil
Institution/Affiliation country:
University of São Paulo/BR
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