O papel da heme oxigenase-1 na lesão celular desencadeada pelo sulfato de polimixina B em células LLC-PK1 / The role of heme oxygenase-1 in the cellular injury caused by polymyxin B sulphate on LLC-PK1 cells

RESUMO

A heme-oxigenase-1 (HO-1) é uma enzima induzível envolvida na degradação do grupo prostético heme, produzindo compostos com funções anti-oxidante, anti-inflamatória, anti-apoptótica e modulatória do sistema imune no rim. A importância de sua indução está associada à resposta adaptativa ao estresse oxidativo e à inflamação envolvidos na gênese da insuficiência renal aguda. O sulfato de polimixina B é um antibiótico usado no tratamento de infecções Gram-negativas e que apresenta um efeito nefrotóxico ainda não completamente elucidado. O objetivo deste estudo foi verificar a viabilidade e apoptose de células LLC-PK1 submetidas ao tratamento com polimixina B, com tempos de exposição diferentes, e pré-tratadas com hemin (indutor de heme oxigenase-1) ou protoporfirina de zinco (inibidor de heme oxigenase-1). Células renais de porco, LLC-PK1, foram cultivadas com polimixina B durante 24, 48 e 72 horas. A apoptose e viabilidade celular foram avaliadas usando diferentes doses do antibiótico Controle (CTL, 0 µM); G1 (12,5µM); G2 (37,5µM); G3 (75µM); G4 (125µM) e G5 (375µM). O hemin (25µM) e a protoporfirina de zinco (10µM) foram administrados uma hora antes da polimixina B. Foram utilizados os métodos Acridine orange/ brometo de etídio (viabilidade) e Hoescht 33342 (apoptose). Os resultados demonstraram redução linear de viabilidade induzida pela polimixina B quando a dose e o tempo de exposição foram aumentados, isto foi confirmado pela variação inversa de apoptose. O hemin aumentou a viabilidade e reduziu apoptose na presença de polimixina B, sugerindo um efeito protetor da HO-1 neste modelo. O efeito observado para a protoporfirina de zinco foi semelhante ao descrito para o hemin. O estudo confirmou a citotoxicidade da polimixina B em células renais e constatou que esse efeito pode ser mediado pela HO-1 considerando o efeito obtido no tratamento com o indutor daquela enzima