Purification and characterization of an alpha-galactosidase from Aspergillus fumigatus

RESUMO

O fungo termofílico Aspergillus fumigatus secreta as enzimas invertase (b-frutofuranosidase) e a-galactosidase (a-D-galactosídeo galactohi-drolase) que estão envolvidas na hidrólise completa dos oligossacarídeos de rafinose. A enzima a-galactosidase foi produzida em meio de cultura do fungo Aspergillus fumigatus crescido por 36 h a 42 °C em meio mineral mínimo contendo os açúcares galactose, ou melibiose, ou rafinose como fontes de carbono. A enzima foi purificada por filtração em gel, seguida por duas cromatografias de troca iônica. A massa molecular da a-galactosidase determinada por SDS-PAGE foi de 54,7 kDa. A atividade máxima da enzima purificada, utilizando o substrato r-nitrofenil-a-D-galactopiranosídeo (rNPGal) foi na faixa de pH entre 4,5 e 5,5 e a 55 °C. A enzima manteve aproximadamente 80% de sua atividade original mesmo após pré-incubação por 90 minutos a 50 °C. O valor de KM para o substrato rNPGal foi 0,3 mM. A enzima foi capaz de hidrolisar melibiose, mas sua atividade foi muito reduzida na presença do substrato rafinose.