Anticorpos monoclonais anti-leishmania chagasi - padronização de reação imunohistoquímica e produção de anticorpos visando a quantificação de antígenos / Antibodies monoclonais anti-leishmania chagasi - padronização of reaction imunohistoquímica and output of antibodies aiming at to quantificação of antígenos

RESUMO

O diagnóstico de certeza da leishmaniose visceral (LV) só é conseguido através da demonstração do parasito diretamente ou em cultura o que implica em procedimentos demorados envolvendo certo risco e/ou dor. Este estudo tem como objetivos a produção de AcMc anti-Leishmania chagasi, padronização de um ensaio de imunohistoquímica para visualização de amastigotas de Leishmania utilizando AcMc e verificação do potencial de um ELISA de inibição utilizando AcMc em quantificar amastigotas de Leishmania. Camundongos BALB/c forma imunizados com antígeno de amastigotas de L. chagasi ou com a proteína recombinante Lc-13 cujo gene foi clonado de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi. Os esplenócitos destes animais forma fundidos com células SP 2-0 através de polietilenoglicol. Estes, juntamente com um AcMc já disponível, o 5A9H8, foram usados em um ensaio de imunohistoquímica utilizando fígado de hamster infectado com L. chagasi parafinado fixado em formalina, testando-se diferentes protocolos de exposição de epitopos. Também com os mesmos AcMc foi realizado um ELISA de inibição a fim de quantificar amastigotas de Leishmania. Foram encontrados dois clones reativos em cada fusão; o 10B4/6 e o 10D8 na primeira e o 2C10D5 e o 11E8H7 na segunda. Os AcMc 10B4/6 e o 10D8 são ambos IgG1, reconhecem antígenos com peso molecular entre 47 e 57 kDa e são possivelmente idênticos. Foi encontrada marcação de amastigotas, em tecidos infectados, com os seguintes AcMc 5A9H8, em seções pré-tratadas com calor, e o 10B4/6 e o 10D8, em seções pré-tratadas com pronase. No ELISA de inibição o AcMc 5A9H8 mostrou-se capaz de detectar no mínimo 10(5) parasitos por poço de placa de microtitulação