Cultura primária de condrócitos articular humana em monocamada / Culture of human articular chondrocyte in monolayer

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi padronizar a metodologia para obtenção de cultura primária de condrócitos de cartilagem hialina articular humana para sua utilização em transplante autólogo. Foram selecionados cinco pacientes do Instituto de Ortopedia e Traumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (IOT-HC-FMUSP) sem doença degenerativa articular, com indicação de cirurgia artroscópica para correção de afecção do ligamento cruzado anterior do joelho. Os fragmentos de cartilagem articular pesando aproximadamente 300-500 mg foram colocados em placas de Petri contendo meio de Eagle modificado por Dulbecco's (DMEM) com 40ug/ml de gentamicina. Cada fragmento foi cortado e colocado em 2mg/ml de colagenase diluída em meio DMEM com 10 por cento de soro fetal bovino (SFB). As células foram isoladas e cultivadas em frasco de cultura T25 em meio DMEM suplementado com 10 por cento de SFB. As células aderiram ao frasco de cultura após 24h e após o 3º dia de cultivo as células apresentavam morfologia elipsóide e estrelada. As culturas foram fixadas e coradas intensamente com azul de toluidina sugerindo que as células iniciaram a síntese de uma nova matriz extracellular. A curva de crescimento mostrou que a razão de crescimento foi em torno do segundo e terceiro dia de cultivo, com a duplicação do número de células semeadas. As culturas apresentaram alta viabilidade celular após o congelamento celular em nitrogênio líquido