Identificación molecular de micobacterias del complejo tuberculoso: estandarización de un método de PCR basado en secuencias conservadas de la región espaciadora 16S-23S del operón de ADN ribosomal / Molecular identification of micobacteria in the tuberculous complex: standarization of a PCR method based on conserved sequences of the 16S-23S spacing region in the ribosomal DNA operon

RESUMEN

Con la finalidad de mejorar el diagnóstico de la tuberculosis, y basados en el estudio de la secuencia de la región espaciadora 16S-23S del operón de ADN ribosomal de treinta especies de micobacterias, se diseño un método de identificación de microbacterias pertenecientes al complejo tuberculoso utilizando la reacción de cadena de la polimerasa (PCR) en combinación con enzimas de restricción. Para ello se diseñaron cuatro primeras (TTS, SS2, S1A, S1B) y se emplearon las enzimas Nhei y MscI. Se estandarizó la técnica de PCR y digestión enzimática, utilizando seis islados micobacterianos (M. tuberculosis, M. kansaii, M. fortuitum, M smegmatis, M. marinum y M.terrae), lográndose la amplificación con los primeros diseñados y digestión enzimática para cada una de las micobacterias. Podemos concluir que la PCR, en combinación con el uso de enzimas de restricción, constituye un método rápido, sencillo, sensible y específico para la identificación de especies micobacterianas pertenecientes al complejo tuberculoso (M. tuberculosis, M fricanum y M, bovis). Sin embargo, es importante tener en cuenta algunas recomendaciones que reducirán los problemas mas de especificidad y falsos positivos obtenidos durante estudio. Una de ellas sería la utilización del fragmento TTS-SS2 en el PCR sólo como control de la presencia e integridad del ADN bacteriano, y el PCR en combinación con la digestión con NheI solamente en el fragmento TTS-S1B