Characterization of adenosine deaminase (ADA) in Hemolymph of Biomphalaria glabrata

RESUMO

A adenosina é uma molécula sinalizadora de muitos eventos celulares. A adenosina desaminase (ADA) é enzima chave para o controle dos níveis intra e extra celulares de adenosina. A atividade da ADA foi detectada em hemolinfa de B. glabrata e suas condições ótimas de ensaio foram determinadas experimentalmente. A variação do pH de 6,2 até 7,8 não causou mudança significativa na atividade. O Km aparente foi de 734 µmoles L-1, usando adenosina como substrato. A maior atividade foi encontrada usando 37ºC como temperatura de incubação. As condições de ensaio padrão foram então estabelecidas como sendo 15 minutos de tempo de incubação, 0,4 µL de hemolinfa por ensaio, pH 6.8 e 37ºC de temperatura de incubação. A enzima apresentou atividades de 834 ± 67 µmols.min-1.L-1 (25ºC) e 2029 ± 74 µmols.min-1.L-1 (37ºC), em torno de 40 e 100 vezes maiores que os níveis encontrados em soro de humanos sadios. Em temperaturas superiores, essa atividade cai 20% a 43ºC e 70% a 50ºC, em 15 minutos. A ADA perde 26 a 78% de sua atividade quando a hemolinfa é pré-incubada a 50ºC de 2 a 15 minutos, respectivamente. Considerando os altos níveis de ADA encontrados pode-se inferir que, em animais sadios e alimentados, a adenosina é mantida em baixas concentrações na hemolinfa. Tendo a atividade da enzima permanecido constante frente à larga faixa de pH testada, sugere-se que a ADA pode atuar com eficiência mesmo em situações adversas que determinem variações no pH da hemolinfa.