Estrutura e organização dos genes da superfamília TS(trans-sialidase) de Trypanosoma cruzi / Structure and organization of genes from tge TS(trans-sialidase) gene superfamily of Trypanosoma cruzi

RESUMO

A seqüência de uma região intersticial de 30 Kb do genoma de T. cruzi (clone Silvio X10.6) foi determinada completamente. Este fragmento foi isolado de uma genoteca de T. cruza construída no cosmídio pcosTL (Kelly et ai. 1994). Os fragmentos do cosmídio C2 obtidos por nebulização foram clonados em plasmídio pUC18 e sequenciados, gerando seqüências de alta qualidade. A seqüência contém 62 fases de leitura aberta (ORF) maiores que 285 pb, entre as quais a maior tem 2679 pb. Entre as maiores ORFs, nove apresentam seqüências similares aos genes de T cruzi e de Leishmania, depositados nos bancos de dados. Cerca de 70 por cento das ORFs não apresentam similaridade ao nível de nucleotídeos e de proteínas com as seqüências depositadas nos bancos de dados GenBank e EMBL. Os genes parasitários identificados incluem cópias de transcriptase reversa, trans-sialidase, sialidase, GP85 e mucina do T. cruza; e proteofosfoglicana, fosfatase ácida e proteína rica em leucina de Leishmania. O contig apresenta vários elementos repetidos. As regiões intergênicas são pobres em repetições de di - e trinucleotídeos e apresentam várias seqüências repetitivas de T cruzi, tais como, TcIRE (Agüero et al. 2000) e C6 (Araya et al. 1997). Uma característica interessante da seqüência foi presença de duas repetições diretas de 664 pb (similar ao elemento E12 do T cruza) flanqueando o gene TS. A comparação das seqüências mostrou que a repetição RD664 é similar ORF-3 do retrotransposon L1 Tc do tipo não-LTR (Olivares et al. 2002) que codifica uma proteína similar à RNase H. A associação do elemento RD664 com o gene TS foi confirmada por hibridização do DNA de T cruza digerido com várias enzimas de restrição e das bandas cromossômicas com as sondas RD664 e TS. Quatro bandas cromossômicas hibridizaram com as duas sondas, sugerindo que o gene TS e o elemento RD664 estão associados em diferentes regiões do genoma. Esta organização foi confirmada em uma pesquisa no banco de dados do Projeto Genoma de T cruza(http//www.genedb.org/genedb/tcruzi). Entre 17 contigs que apresentavam uma cópia completa do gene TS, três apresentaram duas repetições RD664 flanqueando o gene TS na mesma organização encontrada no cosmídio C2. O elemento RD664 pode ser também encontrado flanqueando os genes de mucina. Ensaio de PCR utilizando os…(au)