Isolation by Percoll gradient centrifugation and radiolabeling of bloodstream forms of Trypanosoma cruzi

RESUMEN

Se diseñó un método para purificar las formas sanguíneas de T. cruzi utilizando un gradiente de Percoll contínuo de 6 cm de longitud (Percoll 60% en "HSA-buffer", preformado por centrifugación a 20.000 g durante 90 min a 4-C en un rotor Sorvall SS 34). El mismo se sembró con 6 x 10**7 elementos (parásitos semipurificados de glóbulos rojos por centrifugación diferencial a partir de sangre desfibrinada) y se centrifugó a 800 g, 15 min. Los parásitos se ubicaron en 1,063 a 1,064 g/ml, existiendo una buena resolución entre ellos y los elementos figurados de la sangre. Los parásitos purificados incorporaron H-uridina y dieron valores del 23% precipitables por TCA. La viabilidad de los mismos fue totalmente preservada según lo evidenciado en los ensayos de infectividad "in vivo"