Diagnóstico molecular de Dirofilaríase pulmonar humana causada por Dirofilaria immitis baseado na seqüência do espaçador ribossomal ITS2 / Molecular diagnosis of Human Pulmonary Dirofilariasia human being caused for based Dirofilaria immitis in the sequence of ribossomal spacer ITS2

RESUMO

A dirofilaríase pulmonar humana (DPH) é uma doença que se caracteriza pela presença de nódulo pulmonar não calcificado ocasionado pela presença de vermes imaturos de D. immitis. Normalmente não produz ameaça à saúde do homem por apresentar evolução benigna e, apesar de estar relatada em todos os continentes e ser do conhecimento dos serviços de Radiologia e Pneumologia, poucos nódulos pulmonares retirados chegam ao diagnóstico final, ficando restrito a ser ou não uma neoplasia. Trabalhos prévios baseados na amplificação via reação em cadeia da polimerase (PCR) de regiões repetitivas de rDNA de D. immitis demonstraram a importância da utilização destas como marcadores moleculares espécie-específicos. Este trabalho teve como objetivo gerar subsídios necessários para a criação de um diagnóstico específico para DPH causada por D. immitis, para posterior aplicação de um estudo retrospectivo em materiais de biópsia parafinados contidos nos serviços de Anatomia Patológica. Desenhamos oligonucleotídeos a partir da seqüência do espaçador ribossomal ITS2 de D. immitis, e os utilizamos na técnica da PCR. O produto obtido foi clonado, seqüenciado e, posteriormente analisado com as ferramentas disponíveis no GenBank. Reações de PCR e nested-PCR utilizando como alvo DNA de D. immittis bem como dos nematóides filogeneticamente relacionados Litomosoide sp.,Onchocerca volvulus e Wuchereria bancrofti foram realizadas. Somente para D.immitis obtivemos produto com 405pb que demonstrou similaridade acima de 97 (por cento) com a região ITS2.As reações de “nested-PCR” dos produtos em que se utilizou DNA extraído de espécimes adultos fixados em formalina e emblocados em parafina resultaram em amplicons com aproximadamente 215pb, compatíveis com o tamanho esperado. Este trabalho visou a identificação espécie-específica de D.immitis, em materiais fixados em formalina e emblocados em parafina, sendo ainda o primeiro relato da utilização da técnica de nested-PCR com a mesma finalidade. Foi desenvolvido um diagnóstico molecular que poderá identificar dirofilaríase pulmonar em lesões pulmonares sem confirmação de etiologia. Com essa ferramenta molecular, a frequência dessa parasitose poderá ser melhor avaliada.