Caracterização morfométrica e avaliação da heterogeneidade molecular de Cryptosporidium sp de grupos populacionais no município do Rio de Janeiro / Morphometric characterization and evaluation of the molecular heterogeneidade in isolated physicians of Cryptosporidium sp of population groups in the city of Rio De Janeiro

RESUMO

Cryptosporidium sp. é um protozoário amplamente disperso em numerosas espécies de hospedeiros por todos os continentes. Estudos de epidemiologia molecular têm mostrado que múltiplos genótipos podem circular numa mesma área geográfica. Tais estudos realçam também, que C. hominis e C. parvum são as espécies mais comuns na infecção humana do que as espécies zoonóticas. Entretanto, todas podem infectar tanto indivíduos imunocompetentes quanto imunodeficientes. Nesse trabalho foram analisados isolados clínicos de Cryptosporidium sp. de 14 crianças (0-10 anos) que apresentaram diarréia com suspeita clínica de Rotavírus (grupo 1), 5 crianças (0-4 anos) de uma creche (grupo 2) e 7 pacientes adultos, HIV+ do Hospital Universitário Pedro Ernesto (grupo 3). Objetivamos caracterizar esses isolados circulantes no município do Rio de Janeiro empregando a análise morfométrica (maior e menor diâmetro, perímetro, área e índice morfométrico) de oocistos corados pelo método de Kinyoun a frio, por meio de software para análise de imagens (Image - Pro Plus - Media Cybernetics) e genotipagem, mediante a reação de PCR e da análise por RFLP dos produtos obtidos da nested-PCR. A extração de DNA genômico foi realizada de fezes totais, utilizando solução de tiocianato de guanidina, pérolas de vidro, e polivinilpirrolidona para remoção parcial de inibidores fecais. Os genes alvos para amplificação foram o COWP e o 18S rDNA. Os produtos da nested-PCR para o gene COWP foram digeridos com a enzima RsaI e os de 18S rDNA, com SspI. Foram encontradas diferenças morfométricas significativas em todos os caracteres (p<0,05), independentes dos grupos. Com base nos caracteres mais utilizados (maior e menor diâmetros), os valores encontrados correspondem a C. hominis e C. parvum, não sendo possível distinção morfométrica entre eles. O índice morfométrico em torno de 1,0 não diferiu entre os isolados. Das 26 amostras analisadas molecularmente, 22 apresentaram perfil característico do genótipo de C. hominis, 2 com perfis compatíveis com genótipo zoonótico de C. parvum e 2 com padrão misto, sendo a diferenciação possibilitada pelas análises de RFLP do gene COWP. Conclui-se que no município do Rio de Janeiro há mais de um genótipo de Cryptosporidium circulante, C. hominis é o mais prevalente, e a caracterização desse organismo deve ser realizada pela genotipagem, devido à semelhança biométrica entre os genótipos.