Caracterização fenotípica e padronização de antígenos de H. capsulatum var. capsulatum para o diagnóstico da histoplasmose / Phenotipic characterization of Histoplasma capsulatum var. capsulatum standardization of H. capsulatum exoantigen for histoplasmosis diagnosis

RESUMO

Doze amostras de H. capsulatum foram avaliadas quanto aos aspectos fenotípicos e cinética de crescimento em ágar batata e ágar Sabouraud-dextrose, a 27o C, durante 45 e 90 dias respectivamente. Trinta e três porcento apresentaram textura velutínea e cotonosa, saliência e/ou elevação central, sulcos radiais, faixas concêntricas e pigmentos centrais e difusos. A microscopia óptica verificou-se hifas hialinas, delgadas, septadas, micro e macro aleuroconídios tuberculados; apresentando média de 47 dias para a fase estacionária. 67% eram cotonosas com tendência a ser plana, sendo 75% cotonosa e branca, com hifas delgadas e septadas. Antígenos de H. capsulatum foram obtidos segundo Kaufman e Standard (1978), a partir das amostras cultivadas em ágar Sabouraud-dextrose a 27o C durante 15 e 33 dias. A extração dos determinantes antigênicos foi realizada, cobrindo-se as culturas com solução de mertiolato-borato 15000 por 24 h, a temperatura ambiente. A imunoreatividade dos antígenos foi avaliada por imunodifusão dupla (ID) e immunoblotting (IB) frente a soros homólogos e heterólogos e anticorpos policlonais espécie específicos e heterólogos. Verificamos aumento na sensibilidade da técnica de ID quando empregamos antígeno obtido das amostras 200 e 406, em ambos os tempos de cultivos e 20 vezes concentrado,observando ainda que todos os antígenos avaliados apresentaram 100% de especificidade. Por IB, observamos intensa reatividade dos soros de pacientes com HP doença e infecção frente às frações de 74 e 120 kDa. Concluímos que para a obtenção de antígenos com boa especificidade e sensibilidade, a escolha da amostra fúngica bem comoo meio de cultura assume grande importância. Além disto, a metodologia adotada para a obtenção dos mesmos mostrou-se uma alternativa de baixo custo operacional, de fácil exeqüibilidade, consumindo menor tempo para sua produção