Estudo da capacidade de apresentação de antígenos e da interação com Mycobacterium avium em modelo in vitro de células epitelióides / Study of antigen presentation capacity and Mycobacterium avium interaction on an in vitro model of epithelioid cells

RESUMO

Granulomas são lesões inflamatórias crônicas, constituídas principalmente por fagócitos mononucleares, células epitelióides e células gigantes multinucleadas. Células epitelióides são típicas de granulomas, sendo derivadas de macrófagos. Alguns estudos sugerem que células epitelióides possam ser células apresentadoras de antígenos e que sejam capazes de controlar a multiplicação de bacilos em granuloma experimental, que exclui a participação de linfócitos T. Nosso grupo desenvolveu modelo para geração de células epitelióides in vitro utilizando macrófagos peritoneias de camundongos tratados in vitro por 7 dias com rIL-4. Objetivos: verificar a capacidade de apresentação de antígenos de macrófagos tratados com rIL-4 (aqui chamados de substitutos de células epitelióides) e avaliar a interação das CEs substitutas com Mycobacterium avium. Métodos: foram realizadas imunocitoquímica e imunofluorescência para verificar a presença de moléculas co-estimuladoras e de adesão. Fagocitose de partículas de látex e pinocitose de partículas de Dextran-FITC foram usadas para observar a capacidade de captação de partículas. Para verificar a capacidade de apresentar antígenos foram realizados ensaios de linfoproliferação com OVA e M.avium. Para avaliar a interação das CEs substitutas com M. avium, foi feita infecção dos macrófagos com M. avium e quantificação do percentual de infecção durante o tempo pela coloração de Ziehl-Neelsen. O cultivo de bacilos obtidos após lise dos macrófagos infectados foi realizado em meio 7H10, objetivando verificar sua viabilidade. Para pesquisar moléculas envolvidas na interação bactéria- hospedeiro foi feita análise por Immunoblotting da expressão de galectina-3 e quantificação da produção de NO pela reação de Griess. Análise por ELISA da secreção de citocinas também foi feita. Resultados: foi observado um aumento na expressão de CD86, CD40, CD11 b e CD54 nas CEs substitutas em comparação com macrófagos controle. CEs substitutas foram menos fagocíticas (p < 0,05) e mais pinocíticas do que seus controles. Nos ensaios de linfoproliferação com OVA e M. avium foi possível constatar que ambas as células apresentaram antígenos. Entretanto, CEs substitutas foram mais eficientes na apresentação de M. avium in vivo (p < 0,01). À infecção das células com M. avium foi observado que ambas foram infectadas de forma semelhante (de 25 a 30 por cento). Porém, enquanto o percentual de infecção se manteve ao longo do tempo nas...