Efeito agudo da cirurgia refrativa sobre a síntese de proteoglicanos em explantes de córnea humana / Acute effect of refractive surgery upon proteoglycan synthesis in human cornea explants

RESUMO

Objetivo: Avaliar o efeito agudo (nas primeiras 24 horas) da cirurgia refrativa a laser sobre a síntese de proteoglicanos em explantes de córnea humana mantidos em cultura. Métodos: Foram utilizadas córneas do Banco de Olhos do Hospital São Paulo que foram rejeitadas para transplantes. Três tipos de procedimentos cirúrgicos foram analisados ceratomileuse assistida por excimer laser in situ (LASIK), ceratectomia fotorrefrativa por excimer laser (PRK) e ceratotomia automatizada (AK). Para cada par de córneas, uma foi submetida à cirurgia e a outra foi mantida como seu controle pareado. Após o I procedimento cirúrgico, os botões corneais foram excisados e colocados I imediatamente em meio de cultura F-12 contendo 35S-sulfato para marcação I metabólica dos proteoglicanos (PGs). Após 24 horas de incubação a 37° C, em atmosfera contendo 2,5 por cento de C02, os PGs foram extraídos com hidrocloreto de guanidina 4 M e identificados por uma combinação de eletroforese em gel de agarose e degradação enzimática com mucopolissacaridases bacterianas específicas, vistos por radioautograma e quantificados em um contador de cintilações. Além disso, foram realizadas análise histológica das amostras corneais após os três tipos de procedimentos cirúrgicos e análise de birrefringência (microscopia de polarização) após a realização do LASIK. Resultados: Uma marcante diminuição na incorporação de 35S-sulfato foi observada em explantes de córnea humana submetidos a LASIK. Este efeito pode ser devido à morte celular. Em contraste, os grupos PRK e AK tiveram um efeito variável sobre a incorporação de 35S-sulfato. Isto pode ser decorrente da combinação de três eventos diferentes maior disponibilidade de 35S-sulfato, morte celular (necrose ou apoptose), e/ou ativação de ceratócitos após o trauma cirúrgico. Previamente foi demonstrado que a remoção da camada epitelial leva a um aumento da incorporação de 35S-sulfato em proteoglicanos de dermatam sulfato (DS) em explantes de córnea humana, provavelmente devido a uma maior disponibilidade de 35S-sulfato nas células do estroma superficial e/ou estímulo dos ceratócitos superficiais. Em contraste, a ablação a laser em si pode levar à morte celular, seja por necrose ou por apoptose. Os exames histológicos não apresentaram alterações significativas na resposta cicatricial após os três procedimentos cirúrgicos (LASIK, AK e PRK), talvez porque essa análise (HE) tenha sido realizada 24 horas após as cirurgias. O estudo da birrefringência em LASIK demonstrou uma diminuição das medidas de retardos ópticos (RO). Conclusões: O laser causou uma diminuição na incorporação de 35S-sulfato após o LASIK, provavelmente devido à morte de ceratócitos. Após a realização de PRK e AK, houve uma grande variabilidade na incorporação de 35S-sulfato. A análise de birrefringência demonstrou uma diminuição da ordem molecular e do estado de orientação da agregação hierarquizada da córnea após o LASIK.