Efeito agudo da cirurgia refrativa sobre a síntese de proteoglicanos em explantes de córnea humana / Acute effect of refractive surgery upon proteoglycan synthesis in human cornea explants

RESUMO

Objetivo: Avaliar o efeito agudo (nas primeiras 24 horas) da cirurgia refrativa a laser sobre a síntese de proteoglicanos em explantes de córnea humana mantidos em cultura. Métodos: Foram utilizadas córneas do Banco de Olhos do Hospital São Paulo que foram rejeitadas para transplantes. Três tipos de procedimentos cirúrgicos foram analisados: ceratomileuse assistida por excimer laser in situ (LASIK), ceratectomia fotorrefrativa por excimer laser (PRK) e ceratotomia automatizada (AK). Para cada par de córneas, uma foi submetida à cirurgia e a outra foi mantida como seu controle pareado. Após o I procedimento cirúrgico, os botões corneais foram excisados e colocados I imediatamente em meio de cultura F-12 contendo 35S-sulfato para marcação I metabólica dos proteoglicanos (PGs). Após 24 horas de incubação a 37° C, em atmosfera contendo 2,5 por cento de C02, os PGs foram extraídos com hidrocloreto de guanidina 4 M e identificados por uma combinação de eletroforese em gel de agarose e degradação enzimática com mucopolissacaridases bacterianas específicas, vistos por radioautograma e quantificados em um contador de cintilações. Além disso, foram realizadas análise histológica das amostras corneais após os três tipos de procedimentos cirúrgicos e análise de birrefringência (microscopia de polarização) após a realização do LASIK. Resultados: Uma marcante diminuição na incorporação de 35S-sulfato foi observada em explantes de córnea humana submetidos a LASIK. Este efeito pode ser devido à morte celular. Em contraste, os grupos PRK e AK tiveram um efeito variável sobre a incorporação de 35S-sulfato. Isto pode ser decorrente da combinação de três eventos diferentes: maior disponibilidade de 35S-sulfato, morte celular (necrose ou apoptose), e/ou ativação de ceratócitos após o trauma cirúrgico. Previamente foi demonstrado que a remoção da camada epitelial leva a um aumento da incorporação de 35S-sulfato em proteoglicanos de dermatam sulfato (DS) em explantes de córnea humana, provavelmente devido a uma maior disponibilidade de 35S-sulfato nas células do estroma superficial e/ou estímulo dos ceratócitos superficiais. Em contraste, a ablação a laser em si pode levar à morte celular, seja por necrose ou por apoptose. Os exames histológicos não apresentaram alterações significativas na resposta cicatricial após os três procedimentos cirúrgicos (LASIK, AK e PRK), talvez porque essa análise (HE) tenha sido realizada 24 horas após as cirurgias. O estudo da birrefringência em LASIK demonstrou uma diminuição das medidas de retardos ópticos (RO). Conclusões: O laser causou uma diminuição na incorporação de 35S-sulfato após o LASIK, provavelmente devido à morte de ceratócitos. Após a realização de PRK e AK, houve uma grande variabilidade na incorporação de 35S-sulfato. A análise de birrefringência demonstrou uma diminuição da ordem molecular e do estado de orientação da agregação hierarquizada da córnea após o LASIK.