Clonagem e expressão da principal proteína do capsídeo, VP1, do echovírus sorotipo 30 em células de eucarioto (BHK-21) / Clonagem and expression of the main capsid proteins, VP1, of echovirus serotype 30 in cells of eukaryote (BHK-21)

RESUMO

Os echovirus pertencem ao gênero Enterovirus, família Picornaviridae. Estes vírus apresentam um capsídeo icosaédrico constituído de quatro proteínas VP1-VP4. Os epítopos responsáveis pela indução de anticorpos estão localizados principalmente em VP1, a proteína mais exposta da superfície viral. As principais síndromes clínicas relacionadas aos echovirus são febre inespecífica branda, meningite asséptica, meningoencefalite, paralisia flácida aguda, síndrome de Guillain-Barré, miocardite, exantemas, encefalite e doenças respiratórias. O echovirus sorotipo 30 tem sido um dos enterovirus não-pólio mais freqüentemente associados a casos de meningite asséptica em várias regiões do mundo, incluindo o Brasil. Este estudo teve por objetivo a clonagem do gene VP1 de uma amostra de echovirus 30 isolada de um surto de meningite asséptica ocorrido no Brasil e a expressão da proteína correspondente em cultivos celulares. A proteína VP1 foi escolhida por conter os principais sítios antigênicos do vírion. O gene VP1 da amostra de echo 30 foi amplificado através da técnica de RT-PCR utilizando-se “primers” específicos contendo sítios para as enzimas de restrição Not I e Eco RI, e os códons de iniciação e término de tradução. Esta reação gerou um produto de 896 pb. O cDNA obtido foi clonado no plasmídeo pCR2.1 e subclonado em pcDNA3, um vetor de expressão em mamífero. Com a finalidade de se confirmar a identidade do inserto e averiguar possíveis erros durante o processo de clonagem, os clones obtidos foram seqüenciados. As seqüências foram alinhadas e comparadas com a cepa protótipo de echovirus 30 (Bastianni), exibindo uma homologia nucleotídica e de aminoácidos de 84.5 por cento e 94 por cento, respectivamente. Visando a expressão da proteína viral, células BHK-21 foram transfectadas transientemente utilizando-se o clone pc3/VP1E30. Imunofluorescência de localização citoplasmática foi observada após 24h em células BHK-21.