Virus da hepatite A: epidemiologia molecular e desenvolvimento de técnicas de concentração e detecção em amostras ambientais / Hepatitis A virus: molecular epidemiology and development of concentration techniques and detection in environmental samples

RESUMO

A incidência da hepatite A tem diminuído no Brasil, entretanto o vírus da hepatite A(HAV)devido a sua grande estabilidade ainda persiste no ambiente ocasionando surtos principalmente em creches e escolas devido à ingestão de água e alimentos contaminados.A epidemiologia molecular do HAV associada à detecção do mesmo em águas ambientais permite um melhor conhecimento da circulação do vírus e a definição de fontes de infecção e de medidas de controle desta doença.Nossos objetivos foram avaliar a aplicação de testes moleculares no diagnóstico da hepatite A para(i)a definição de casos de hepatite aguda em pacientes negativos para o anticorpo anti-HAV IgM;(ii)no estudo da variabilidade genômica em diferentes regiões do Brasil;(iii)na detecção qualitativa e quantitativa do genoma do HAV em águas ambientais.Um estudo com 241 indivíduos expostos a surtos epidêmicos e pacientes com hepatite aguda não A-C foi possível detectar o RNA do HAV nas amostras de soro coletadas de indivíduos negativos para o anticorpo anti-HAV demonstrando a aplicabilidade da técnica de nested RT-PCR no diagnóstico precoce em surtos epidêmicos,assim como para elucidar casos de hepatite aguda de etiologia desconhecida.Os estudos sobre o seqüenciamento nucleotídico de isolados de HAV provenientes de surtos e casos esporádicos da doença nas regiões Sudeste,Norte e Nordeste do país demonstraram a co-circulação dos subgenótipos IB e IA nestas regiões.A eficiência...para titulação do HAV.Dois métodos de concentração[eluição com tampão fosfato uréia arginina e reconcentração com cloreto de magnésio(método 1);e eluição com hidróxido de sódio/reconstrução com concentrador comercial(método2)]e de detecção(nested RT-PCR e PCR em tempo real)do HAV foram avaliados inoculando a cepa HAF-203 com título conhecido em 4 tipos de amostras de água(rio,mar,mineral e torneira).O método de concentração não afeta a detecção pelo PCR quantitativo,mas é extremamente importante quando se utiliza o PCR qualitativo...