Evaluation of fixative solutions for ultrastructural analysis of brown spider Loxosceles intermedia (araneae: sicariidae) tissues

ABSTRACT

In view of the widely varying compositions of fixative solutions used for studying spiders, five different fixative formulas were tested for fixing male brown-spider (Loxosceles intermedia) gonad tissues. The brown spider represents a public health problem in Curitiba (Paraná State, Brazil). Morphological study of its gonads may aid in understanding the reproductive strategies of this species, and possibly in developing a reproduction control program. The fixatives tested contained glutaraldehyde alone or combined with paraformaldehyde, and the buffers cacodylate or phosphate, with or without the addition of sucrose or sodium chloride as osmolytes. Those containing 2.5 percent glutaraldehyde and 2 percent paraformaldehyde in 100 mM phosphate buffer with 200 mM sucrose, or in 200 mM sodium cacodylate, satisfactorily preserved mitochondria, the Golgi apparatus, and the membranes in general. These formulas were nearly isosmotic (439 mOsm/kg H2O and 455 mOsm/kg H2O respectively) to brown spider hemolymph (478 mOsm/kg H2O). With respective to the fixative agents, a glutaraldehyde-paraformaldehyde combination resulted in optimal fixation of Loxosceles intermedia cells. For other species of spiders, hemolymph osmolality should be considered, but the fixative formulas cited above would also probably yield good results.

RESUMO

Dada a variabilidade na composição de soluções fixadoras utilizadas em aranhas, cinco diferentes fixadores foram elaborados para a análise ultra-estrutural dos tecidos da aranha marrom Loxosceles intermedia. A aranha marrom representa um problema de saúde pública na cidade de Curitiba, e o estudo morfológico de suas gônadas pode auxiliar na compreensão de suas estratégias reprodutivas e, possivelmente, no desenvolvimento de um programa de controle da sua população. As fórmulas usadas continham glutaraldeído com ou sem paraformaldeído, tampão cacodilato ou fosfato, e NaCl ou sacarose como osmólitos. As soluções fixadoras compostas por 2.5 por cento glutaraldeído e 2 por cento paraformaldeído, em tampão fosfato com adição de sacarose ou em 200 mM cacodilato de sódio, preservaram bem estruturas como mitocôndrias, aparelho de Golgi e membranas em geral. Os tampões são praticamente isosmóticos (439 mOsm/kg H2O e 455 mOsm/kg H2O, respectivamente) à hemolinfa da aranha marrom (478 mOsm/kg H2O). Ainda, com relação aos agentes fixadores, a combinação do glutaraldeído e paraformaldeído levou a uma melhor preservação das células. Para outras espécies de aranhas, a osmolalidade da hemolinfa deve ser medida e considerada, mas as fórmulas acima citadas podem ser testadas, com chance de sucesso.