Viabilidade do fígado bioartificial utilizando hepatócitos humanos imunoprotegidos por macroencapsulação / Assessment of bioartificial liver using human hepatocytes immunoprotected by macroencapsulation

RESUMO

OBJETIVO: O transplante de hepatócitos xenogênicos encapsulados pode ser utilizado no futuro em situações como a insuficiência hepática fulminante. Porém, observa-se perda precoce da expressão de genes hepatocitários específicos em hepatócitos humanos. O objetivo deste estudo é avaliar a influência da resposta imunológica na perda da expressão genética hepatocitária de hepatócitos humanos encapsulados e transplantados em ratos. MÉTODO: Hepatócitos humanos foram isolados de fragmentos hepáticos, encapsulados em fibras e transplantados em ratos. Nos dias 3, 7 e 14 após o transplante as fibras foram coletadas e avaliadas a morfologia por microscopia óptica e eletrônica, e a expressão dos genes por biologia molecular. O ARNm da albumina humana foi quantificado por RT-PCR e Northern blot. A resposta imunológica contra os hepatócitos foi avaliada através do ADN hepatocitário na busca de apoptose do núcleo celular e pelo aumento da expressão do CMH de classe I. RESULTADOS: Os aspectos morfológicos dos hepatócitos mantiveram-se normais até o sétimo dia após o transplante. Não se observaram células envolvidas com resposta imunológica do receptor nas fibras. Os transcritos da albumina foram detectados até D-14. Entre os dias 3 e 7 estavam em 30 por cento em relação ao dia 0. A análise do ADN mostrou bandas preservadas sem a presença de fenômenos de apoptose nos diferentes dias. Não ocorreu aumento da expressão do CMH de classe I. CONCLUSÕES: Hepatócitos humanos encapsulados e transplantados em ratos permanecem viáveis apesar da diminuição da expressão de determinados genes. Este fenômeno, não se deve à resposta imunológica do receptor, mas ao próprio processo de isolamento celular.

ABSTRACT

BACKGROUND: Xenogeneic hepatocytes encapsulated in semipermeable membranes could be used in the future; however, encapsulated human hepatocytes presented an early decrease of hepatocyte gene expression. The objective of this study is to investigate the immunological consequences of intraperitoneal implantation of encapsulated xenogeneic hepatocytes on gene expression. METHODS: human hepatocytes were encapsulated in hollow fibers and transplanted in the peritoneal cavity of rats. The fibers were explanted for analysis at days D3, D7 and D14 following transplantation. Morphological features under light and electron microscopies and gene expression were compared to those of non-transplanted encapsulated hepatocytes. Human albumin mRNAs were quantified by RT-PCR and Northern blot. Immunological activity against human hepatocytes was assessed by the analysis of DNA searching for nucleolar apoptosis and also by the rise on MHC class I expression. RESULTS: Transplanted hepatocytes were more than 60 percent viables and exhibited morphological criteria of hepatocytic differentiation up to D7. At no time cells involved with the immunological response were observed inside the fibers. Albumin transcripts were also detected up to D14. At D3 and D7, albumin mRNA levels were of 30 percent, compared to control. The DNA analysis showed well preserved bands with no apoptosis at any time of evaluation. There was no rise on MHC class I expression. CONCLUSION: Human hepatocytes remain viable following encapsulation and intraperitoneal transplantation in rats. Although there is a decrease in gene expression this is not due to a host response against those cells. It seems that this effect is rather related to the process of hepatocyte isolation itself.