Successful amplification of mitochondrial DNA from dentin of the bottlenose dolphin Tursiops truncatus

ABSTRACT

Twenty-four teeth of Tursiops truncatus from the collection of the Marine Mammals Laboratory (FURG-RS) were analysed for their potential as DNA source for population genetic and taxonomic studies. All teeth were submitted to decontamination, grinding and demineralisation processes. Dentin powder was weighed for DNA extraction, which was evaluated by the amplification of two mitochondrial genes through PCR using universal primers. Cytochrome-b gene was amplified successfully. PCR products showed concentrations of 3-12 ng/µl for dentin powder, which was positively correlated to the quantity of dentin powder used for DNA extraction. To rule out contamination a SSCP was carried out including positive controls, and samples of humans involved in the analysis. The SSCP patterns for T. truncatus differed from all others, showing also polymorphism for the region. It was concluded that dentin was a good source of mtDNA for genetic studies in dolphins.

RESUMO

Vinte e quatro amostras de material dentário de Tursiops truncatus oriundas da coleção do Laboratório de Mamíferos Marinhos (FURG-RS) foram avaliadas para determinar seu potencial como fonte de DNA para estudos genético-populacionais e sistemáticos. Todos os dentes foram submetidos a processos de desinfecção, trituração e desmineralização. A dentina obtida foi pesada previamente à extração de DNA, a qual foi avaliada através da amplificação de dois genes mitocondriais, através da técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), utilizando oligonucleotídeos iniciadores universais. Obteve-se sucesso apenas na amplificação do gene Citocromo-b. Destes produtos obtiveram-se concentrações de 3-12 ng/µl para o material dentário, observando-se uma relação linear positiva com a quantidade em gramas utilizada na extração de DNA. Com o objetivo de eliminar a possibilidade de contaminação foi realizada uma análise SSCP (Polimorfismo Conformacional de Fita Simples) incluindo os controles positivos e amostras de pessoas envolvidas nas análises. Os padrões SSCP de T. truncatus obtidos diferiram das outras amostras, observando-se polimorfismo na região para os exemplares de T. truncatus analisados. Concluiu-se que é possível obter DNA mitocondrial para estudos genético-populacionais e taxonômicos a partir de material dentário de golfinhos.