Regulação da adesão célula-célula e do citoesqueleto de acina em células de adenocarcinoma de cólon humano, CACO-2 / Regulation of the adhesion cell-cell and cytoskeleton of actin in cells of human adenocarcinoma of colon, CACO-2

RESUMO

Células epiteliais adquirem motilidade durante a transição epitelial-mesenquimal, evento importante da tumorigênese. Esta transição é caracterizada por perda da polaridade celular, desorganização da adesão célula-célula, e reorganização do citoesqueleto de acina, porém as vias de sinalização envolvidas nesse processo são pouco conhecidas. Alguns estudos..O objetivo desse trabalho foi analisar... Nesse estudo, verificamos que a retirada do cálcio extracelular ocasionou a) a redistribuição da proteína de junções aderentes E-caderina, e das proteínas ocludina, claudina-1 e ZO-1, das junções oclusivas, conforme mostrado por imunofluorescência e fracionamento subcelular em Triton X-100 seguido por imunotransferência; b) alteração na funcionalidade das junções oclusivas, de acordo com o decréscimo na resistência elétrica transepitelial; c) alterações morfológicas com a abertura de espaços nas regiões de contatos célula-célula, visualizados por microscopia eletrônica de transmissão; d) alterações no citoesqueleto de actina, na região perijuncional e na distribuição das fibras de estresse, observados por microscopia confocal; e e) redistribuição de proteína Rho-GDI, analisada por imunotransferência. Além disso, foi mostrado que as modificações no complexo juncional e na região apical do citoesqueleto de actina, ocasionadas pela retirada do cálcio extracelular, foram prevenidas pela inibição da PKA com o inibidor H-89, e a ativação de PKA com Forskolina, ocasionou efeitos similares à retirada do cálcio sobre os microfilamentos. As inibições da GTPase Rho com Toxina A, e de sua efetora ROCK com Y-27532, também ocasionaram desorganização do citoesqueleto de actina. Ainda, a ativação de PKA alterou a distribuição de Rho-GDI, sugerindo que PKA poderia inibir Rho. A inibição de ROCK em meio normal causou aumento na permeabilidade paracelular, abertura de espaçõs no complexo uncional, e redistribuição de claudina-1, mas surpreendentemente preveniu a translocação de E-cader.