Intralaboratory optimization and validation of a method for patulin determination in grapes by Thin-Layer Chromatography

ABSTRACT

The aim of this work was to optimize and validate, by intralaboratorial procedures, a method for the determination of patulin in grapes by thin-layer chromatography. The steps of extraction, cleanup, detection and quantification were optimized. For the validation of the method, recovery assays with standard solutions and artificially contaminated samples were carried out. The mean recovery and the variation coefficient were 65.4 percent and 7.58 percent, respectively. The optimized conditions were: 50 mL of grape juice, three extraction stages (with 100 mL of ethyl acetate in the first stage and 50 mL in second and third stages), and 100 æL of ethanol to solubilize the extract. The solvent-system used was toluene - ethyl acetate - formic acid (6:3:1), and 0.5 percent MBTH in 5 percent formic acid was sprayed on the plates to intensify the fluorescence. The visual detection and quantification limits were 7.44 ng and 15.87 æg.kg-1, respectively. The optimized and validated method demonstrated sufficient efficiency for adoption in the monitoring of patulin in grape.

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi otimizar e validar, por procedimentos intralaboratoriais, um método de determinação de patulina em uva por cromatografia em camada delgada. Foram realizados testes de otimização das etapas de extração, limpeza, detecção e quantificação. Para validação do método foram realizados ensaios de recuperação com soluções padrões e amostras artificialmente contaminadas. A recuperação e o coeficiente de variação foram 65,4 por cento e 7,58 por cento, respectivamente. As condições otimizadas foram: 50 mL do suco da uva; três etapas de extração, 100 mL de acetato de etila na primeira etapa e 50 mL na segunda e terceira etapas; 100 æL de etanol para solubilizar o extrato; a fase móvel tolueno-acetato de etila-ácido fórmico (6:3:1) e o revelador o MBTH 0,5 por cento em ácido fórmico 5 por cento. O limite de detecção visual foi de 7,44 ng e o de quantificação de 15,87 æg/kg. O método otimizado e validado apresentou eficiência para ser adotado em atividades de monitoramento de patulina em uva.