Tipificación molecular del virus dengue 3 durante el brote epidémico de dengue clásico en Lima, Perú, 2005 / Molecular typing of dengue 3 virus during the classic dengue outbreak in Lima-Peru, 2005

RESUMEN

Objetivos: Identificar mediante trascripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) y sitios específicos de restricción - reacción en cadena de la polimerasa (RSS-PCR) al agente causal del brote epidémico presentado en el distrito de Comas, Lima en abril del año 2005. Materiales y métodos: veinte muestras de suero colectadas durante el brote de dengue fueron procesados por RT-PCR para determinar el serotipo, esta técnica se realizó en un solo paso. Luego se aplicó la técnica RSS-PCR para la identificación del genotipo circulante y se corroboraron los resultados posteriormente con aislamiento viral y secuenciamiento. Resultados: El análisis del RTPCR del ARN extraído de las muestras presentó un producto amplificado de 290pb que corresponden al dengue serotipo 3 (DEN 3). El análisis de los productos de RSS-PCR del ARN extraído a partir de aislamientos de DEN 3 correspondió al patrón C, incluido en el genotipo III. Los aislamientos de los virus dengue 3 en líneas celulares C6/36, tipificadas por IFI y el secuenciamiento genético confirmaron los resultados obtenidos por las pruebas previamentedescritas. Conclusión: Durante el brote epidémico de dengue clásico en Lima, circuló el genotipo III del virus DEN 3.

ABSTRACT

Objectives: To identify the causative agent of the outbreak that occurred in Comas, Lima in April 2005 using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and specific restriction site-PCR (RSS-PCR). Materials and methods: 20 serum samples collected during the dengue outbreak were assessed using RT-PCR for identifying serotypes, this technique was performed in a single step. Later, the RSS-PCR method was used to identify the circulating serotypes, and the results were corroborated by viral isolation and sequencing. Results: RT-PCR of viral RNA taken from the samples showed a 290-pb amplified product corresponding to dengue virus serotype 3 (DEN 3). RSS-PCR product analysis of RNA from DEN 3 isolates corresponded to pattern C, included in genotype III. Dengue 3 virus isolates in C6/36 cell lines identified using indirect immunofluorescence and gene sequencing confirmed the results obtained using the aforementioned tests. Conclusion: During the classic dengue fever outbreak in Lima, DEN 3 genotype III circulated.