Identificación molecular de mutaciones puntuales relacionadas con resistencia a drogas en VIH-1 de pacientes peruanos / Molecular identification of point mutations related to HIV-1 drug resistance in peruvian patients

RESUMEN

Objetivo: Identificar mutaciones puntuales relacionadas con resistencia a drogas en VIH-1 de pacientes peruanos.Materiales y métodos: Se seleccionaron 11 muestras de VIH provenientes de sangre total de sujetos con tratamientoantirretroviral (ARV). Posteriormente se realizó la optimización de la amplificación de 337 pb del gen de la transcriptasareversa (tr) y 377 pb de todo el gen de la proteasa (prt). Los productos de PCR fueron secuenciados directamentepara el análisis de mutaciones de resistencia. Las secuencias finales fueron analizadas en programas de análisis demutaciones de la HIV Drug Resistance Database de la Universidad de Stanford. Resultados: La optimización de laconcentración de ADN (2,5 ng / μL) así como la concentración de magnesio (4 mM) fueron factores críticos para la amplificaciónde la tr y la prt respectivamente. De otro lado, el análisis de secuencia reveló la presencia de las mutacionesT215Y y la M184V en tr, implicadas en conferir resistencia a zidovudina (AZT) y estavudina (D4T) así como a lamivudina(3TC) y emtricitabina (FTC) respectivamente. En prt se observaron las mutaciones D30N y N88D implicadas enconferir resistencia a nelfinavir (NFV). Es importante señalar que sólo tres muestras de VIH-1 presentaron mutacionesde resistencia, las demás mostraron mutaciones compensatorias. Conclusiones: Se demuestra la existencia de mutacionesde resistencia a ARV a nivel de tr y prt de VIH-1 en sujetos peruanos que reciben terapia TARGA. Se requierende mayores estudios para establecer un perfil de resistencia a ARV en la población peruana.

ABSTRACT

Objective: Identify point mutations related to HIV-1 drug resistance in Peruvian patients. Materials and methods: A total of 11 HIV-1 positive samples were selected, all were obtained from the whole blood of subjects undergoing anti-retro viral (ARV) treatment. 337 gene base pairs (bp) from reverse transcriptase (rt) and 377 bp from the whole protease gene (prt) were optimized. PCR products were sequenced directly for the analysis of resistance mutations. Final sequences were analyzed in the University of Stanford HIV Drug Resistance Database programs. Results: Optimization of DNA concentration (2,5 ng / µL), as well as magnesium concentration (4mM) were critical factors for rt and prt amplification, respectively. On the other hand, the sequence analysis showed the presence of T215Y and M184V mutations in rt , implicated in zidovudine (AZT), stavudine (D4T), lamivudina (3TC) and emtricitabine (FTC) resistance, respectively. In prt, mutations D30N and N88D were observed. These mutations have been implicated in nelfinavir (NFV) resistance. It must be highlighted that only three HIV-1 positive samples showed resistance mutations. The remaining samples showed compensatory mutations. Conclusions: This study demonstrated the existence of ARV resistance mutations at the HIV-1 rt and prt levels in Peruvian patients undergoing HAART therapy. Further studies are required to establish an ARV resistance pattern in the Peruvian population.