Estudo do segmento consenso adjacente ao domínio TM2 e parte do domínio TM2 do receptor P2X7: dinâmica molecular e atividade de canal iônico / Study of the segment adjacent consensus to domain TM2 and part of domain TM2 of receiver P2X7: molecular dynamics and activity of ionic canal

RESUMO

Os receptores purinérgicos do subtipo P2X7 (P2X7R) são proteínas de membrana que formam canais em resposta ao ATP extracelular. Permitem a passagem de cátions através da membrana celular, sendo expressos, preferencialmente, em células do sistema imune. Além disso, o P2X7R possui características bastante distintas dos demais subtipos da família P2X (P2XR) como, por exemplo, o domínio C-terminal mais longo e a capacidade de formar um grande poro citolítico que permite a passagem de moléculas de até 900 Da, sob ativação prolongada de ATP. Apesar dos vários estudos para a elucidação dos mecanismos de formação do poro associado a esses receptores, nenhum dado conclusivo foi publicado. O mesmo ocorrendo com sua estrutura molecular. Entretanto, alguns autores sugerem que o segmento M2 dos P2XRs, mais especificamente a região prevista como uma alfa-hélice transmembrana (TM2), não poderia estar configurada apenas como uma alfa-hélice, e sendo ainda esta região responsável pela seletividade desses canais. Outros autores demonstraram, através de ferramentas de bioinformática, que os P2XRs estariam configurados preferencialmente em folha beta e voltas. Nesse contexto, analisamos o segmento M2 e a região desse segmento composta por resíduos consensos (entre todos os subtipos de P2XRs) adjacentes ao TM2 do P2X7R de humano e parte do mesmo (peptídeo ADSEG) por programas de bioinformática. Os resultados das predições de bioinformática confirmaram os dados descritos na literatura de que o segmento M2 não estaria apenas configurado com estruturas em alfa-hélice, mas também em folhas beta. Com relação ao peptídeo ADSEG as predições de bioinformática e de dinâmica molecular foram confirmadas experimentalmente por dicroísmo circular. Onde esse segmento também estaria configurado preferencialmente em folha beta. Com o objetivo de testar se esse peptídeo e o P2X7R recombinante formariam canais ou poro citolítico, utilizamos bicamada lipídica artificial e patch-clamp.