Genotipicação de Clostridium perfringens isolados de frangos de corte através da PCR múltipla / Genotyping Clostridium perfringens broiler chickens isolates by multiplex PCR products analyses

RESUMO

Clostridium perfringens (Cp) é uma bactéria aneróbica gram positiva que, além de provocar gangrena gasosa e enterotoxemia em humanos e animais, constitui-se na principal causa de enterite necrótica em aves de criações intensificadas. A identificação dos isolados foi realizada pela reação de lecitinase em ágar TSC-gema de ovo, colônias com dupla hemólise em ágar sangue desfibrinado de eqüino, coloração de Gram e provas bioquímicas. Das amostras analisadas, 171Cp foram isolados em jejuno e íleo de frangos de corte provenientes de um frigorífico da região de Pará de Minas-MG. Cp foi isolado em 62 (49,6 por cento) de 125 amostras de conteúdo lumenal de jejunos e em 109 (87,2 por cento) de igual número de íleos dos frangos de corte. Utilizando-se a técnica da PCR múltipla para genotipicacão das estirpes de Cp, de acordo com os genes para as toxinas principais e letais (cpa, cpb, etx e iA), da toxina cpb2 (cpb2) e enterotoxina (cpe), as estirpes de Cp isoladas foram classificadas em cinco tipos toxigênicos (A-E). Das 62 estirpes de Cp isoladas do jejuno, foram obtidos 42/62 (67,7 por cento) tipo A, 1/62 (1,6 por cento) tipo A com produto de amplificação para o gene da toxina beta2, 0/62 (0 por cento) tipo B, 17/62 (27,4 por cento) tipo C, 1/62 (1,6 por cento) tipo D. Das 109 amostras de Cp isolados do íleo das aves foram obtidos 62/109 (56,9 por cento) tipo A, 3/109 (2,7 por cento) tipo A com produto de amplificação para o gene da toxina beta2, 1/62 (0,9 por cento) tipo B, 38/109 (34,9 por cento) tipo C, 1/109 (0,9 por cento) tipo D. Cp A (60,8 por cento) e Cp C (32,2 por cento) foram os tipos toxigênicos predominantes em conteúdo intestinal de frango de corte. Cinco (2,9 por cento) das 171 amostras de Cp isolados não foram tipificadas. Não foram detectados os genes codificadores das toxinas iota (iA) e enterotoxina (cpe) em nenhuma das 171 estirpes de Cp caracterizados.

ABSTRACT

Clostridium perfringens (Cp) is an anaerobic gram-positive bacterium which causes gaseous gangrene and enterotoxaemias in humans and domestic animals, besides being the primary cause of necrotic enteritis in poultry. Cp isolates were preliminary identified according to the lecithinase test on agar TSC-egg yolk, colony with double haemolysis in desfibrinated horse blood agar, Gram staining and biochemical tests. Cp isolates (171) were obtained from the intestinal content of broiler chickens sampled in a slaughterhouse in Pará de Minas city, MG, Brazil. Cp was isolated in 62/125 (49.6 percent) strains from jejunum content and in 109/125 (87.2 percent) of ileum. Cp strains were classified into five toxigenic types (A-E), using multiplex PCR assay for genotyping of the principal and lethal toxins in the detection of genes coding for toxins alfa, beta, epsilon e iota, nomely genes cpa, cpb, etx e iA genes, beta2 toxin (cpb2) and enterotoxin (cpe). From a total of 62 Cp jejunum isolates obtained 42/62 (67.7 percent) were type A, 1/62 (1.6 percent) type A with the amplification of products for beta2 toxin gene (A/B2), 0/62 (0 percent) type B, 17/62 (27.4 percent) type C and 1/62 (1.6 percent) type D. A total of 109 ileum Cp isolates were obtained being 62/109 (56.9 percent) type A, 3/109 (2.7 percent) type A/B2 toxin gene, 1/62 (0.9 percent) type B, 38/109 (34.9 percent) type C, 1/109 (0.9 percent) type D. Cp A (60.8 percent) and Cp C (32.2 percent) toxigenic types were the most prevalent types in the analyzed intestinal contents of broiler chickens Cp A 104/171 (60.8 percent) and 55/171 (32.2 percent) toxigenic types which were the most prevalent types analyzed into two partes of the intestinal content of broiler chickens. Five (2.9 percent) out of 171 Cp isolates were not typified. The iota toxin (iA) and enterotoxin gene (cpe) codifying genes were not identified.