Efeito do glicerol, etilenoglicol, acetamida e leite desnatado na criopreservação de espermatozóides eqüinos / Effects of glycerol, ethylene glycol, acetamide, and dried skim milk in cryopreservation of equine sperm

RESUMO

Avaliou-se a eficácia de diferentes associações de crioprotetores no congelamento de sêmen eqüino. Foram utilizados três ejaculados de oito garanhões para testar o diluidor lactose-EDTA-gema de ovo com as seguintes associações de macromoléculas e crioprotetores T1 - glicerol 5 por cento (controle); T2 - metilcelulose 0,5 por cento, rafinose 0,15g e acetamida 2,5 por cento; T3 - metilcelulose 0,5 por cento, rafinose 0,15g e acetamida 3,5 por cento; T4 - metilcelulose 0,5 por cento, rafinose 0,15g e acetamida 5 por cento; T5 - glicerol 5 por cento e 2,4g de leite desnatado; T6 - 1 por cento de glicerol, 4 por cento de etilenoglicol e 2,4g de leite desnatado; T7 - 5 por cento de etilenoglicol e 2,4g de leite desnatado. O sêmen foi diluído em meio Kenney (11), centrifugado a 400 x g por 12 minutos, ressuspendido nos diluidores para atingir a concentração de 100X10(6)/ml, envasado em palhetas de 0,5ml e congelado 3cm acima do nível de nitrogênio líquido por 10 minutos. O descongelamento foi realizado em banho-maria a 75ºC por sete segundos. Após o descongelamento foram avaliados motilidade total e progressiva, vigor, morfologia espermática e integridade estrutural e funcional da membrana plasmática. O T1 apresentou os maiores valores de motilidade total e progressiva (38,4 por cento e 33,8 por cento, respectivamente). O vigor e os resultados do teste HO não diferiram entre os tratamentos. Os diluidores contendo leite em sua composição (T5, T6 e T7) apresentaram maiores valores de integridade funcional e estrutural da membrana plasmática. Pode-se concluir que as modificações incorporadas aos meios diluidores testados não resultaram em melhor efeito crioprotetor que o meio à base de glicerol 5 por cento no congelamento do sêmen eqüino.

ABSTRACT

The efficacy of different combinations of cryoprotectants for equine semen was evaluated. Three ejaculates of eight stallions were used to test the lactose-EDTA-egg yolk extender with the following association of cryoprotectants T1 - glycerol 5 percent (control group); T2 - methyl cellulose 0.5 percent, raffinose 0.15g, and acetamide 2.5 percent; T3 - methyl cellulose 0.5 percent, raffinose 0.15g, and acetamide 3.5 percent; T4 - methyl cellulose 0.5 percent, raffinose 0.15g, and acetamide 5 percent; T5 - glycerol 5 percent and 2.4g of dried skim milk; T6 - glycerol 1 percent, ethylene glycol 4 percent, and 2.4g of dried skim milk; T7 - ethylene glycol 5 percent and 2.4g of dried skim milk. After collection, Kenney extender was added to the semen 11, and centrifuged at 400 x g for 12 minutes. Sperm pellets were diluted to reach 100x10(6) cells/ml. Spermatozoa were frozen in 0.5ml straws 3cm above the nitrogen level, during 10 minutes. Thawing of samples was done at 75ºC for seven seconds followed by immersion of the straw in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Post-thaw total and progressive motilities and sperm vigor were evaluated. Sperm membrane integrities of the tail and caput, respectively, were evaluated by the hypoosmotic swelling test and fluorescent dyes. T1 showed the highest post-thaw total and progressive motilities (38.4 percent and 33.8 percent, respectively). No significant difference was found among treatments for vigor and hypoosmotic swelling test. T5, T6, and T7 showed higher post-thaw values for sperm membrane integrity. It may be concluded that the association of cryoprotectants used in this experiment did not result in better cryoprotectant effect than 5 percent glycerol for equine semen cryopreservation.