Caracterização de tripsinas em Lutzomyia longipalpis: principal vetor da leishmaniose visceral no Brasil / Characterization of tripsyns in Lutzomyia longipalpis: main vector of leishmaniose visceral in Brazil

RESUMO

A Leishmaniose visceral é um importante problema de saúde pública. No Novo Mundo é causada por Leishmania infantum chagasi e seu principal vetor no Brasil é Lutzomyia longipalpis. A atividade enzimática do tubo digestivo durante a digestão do inseto é um dos principais obstáculos que L. i. chagasi deve superar para estabelecer a infecção. Tripsinas são as principais proteases secretadas no intestino do inseto e sua transcrição pode variar a longo do processo digestivo. Nós estamos interessados em estudar aspectos moleculares da alimentação sangüínea, para caracterizar moléculas específicas que possam ter uma participação significativa na interação parasita-vetor e que possam ser usadas no desenvolvimento de potenciais alvos para novas estratégias a serem usadas no controle da leishmaniose. Nós isolamos e sequenciamos completamente dois cDNAs (Lltryp1 e Lltryp2) a partir de uma biblioteca de expressão de tubo digestivo de L. longipalpis alimentada com sangue, e suas seqüências são semelhantes a outras tripsinas de insetos. Iniciadores específicos foram desenhados para serem usados em RT-PCR semi-quantitativo para estudar sua expressão diferencial. Nossos experimentos mostram que a transcrição de Lltryp1 tem um pico em aproximadamente 12 horas após a ingestão de sangue, e desaparece após 48 horas, parecendo ser uma tripsina induzida or sangue. Lltryp2 tem alta transcrição em fêmeas não alimentadas e em machos, semelhante a uma enzima constitutiva. Entretanto sua transcrição diminui após a alimentação. Uma alta transcrição deste mesmo gene é detectada em 96 horas, quando o processo digestivo está finalizado e não hámais conteúdo a ser digerido. Estamos estudando a imunolocalização de tripsinas no tubo digestivo do inseto, usando um anticorpo anti-tripsina produzido por nosso grupo. Nossos resultados preliminares indicam um reconhecimento do anticorpo distribuído pelo citoplasma. Este anticorpo também foi usado para determinar o aparecimento desta enzima...sangue.