Vitrificação de embriões Mus domesticus domesticus contidos em volumes diferentes de 9, 0 M de etileno glicol / Vitrification of Mus domesticus domesticus embryos exposed to differents volumes of 9.0 M ethylene glycol solution

RESUMO

Os experimentos tiveram como objetivo determinar a taxa de eclosão dos embriões vitrificados em volumes diferentes de 9,0M de etileno glicol. Simultaneamente, testaram-se dois procedimentos de estocagem dos fios de teflon, denominados caixade aço inoxidável e globete/raque. No experimento I, os 881 embriões coletados foram distribuídos em 4 tratamentos tratamento1 (T1 = controle) 307 embriões foram cultivados in vitro em meio PBSm, acrescido de 0,4 por cento de BSA; tratamento 2 (T2) 292embriões foram expostos à solução de glicerol 10 por cento acrescida de 0,4 por cento de BSA, envasados em palhetas de 0,25 mL esubmetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool®; tratamento 3 (T3) 138 embriões foram expostos durante 2minutos à solução de desidratação (10 por cento de EG + 6 por cento BSA em PBSm) e então transferidos para a solução de vitrificação (50 por centode EG + 6 por cento de BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos sendo após transferidos para o volume de 1 µL nointerior de um fio de teflon, medindo 0,4mm de diâmetro, 2,0cm de comprimento e 0,05mm de espessura. Os fios foramacondicionados em uma caixa de aço inoxidável para serem armazenados em nitrogênio líquido; tratamento 4 (T4) 144 embriõesforam expostos à solução de desidratação (10 por cento de EG + 6 por cento BSA em PBSm) e após 2 minutos, foram transferidos para asolução de vitrificação (50 por cento de EG + 6 por cento BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos e foram colocados em volumede 1 µL no interior do fio de teflon. Os fios de teflon foram estocados em globetes unidos às raques e mantidos em nitrogêniolíquido. Após o aquecimento, os embriões foram cultivados em PBSm suplementado com 0,4 por cento de BSA. As taxas de eclosãoembrionária observadas foram T1=79,80 por cento (245/307); T2=40,07 por cento (117/292); T3=39,13 por cento (54/138) e T4=25,69 por cento (37/144).No segundo experimento 747 embriões foram distribuídos em 3 tratamentos tratamento 1 (T1= controle) 80 embriões foram...

ABSTRACT

This work was performed with Mus domesticus domesticus embryos to verify the in vitro viability of vitrified embryos usingdifferents volumes of ethylene glycol-based solution. The experiment I consisted of four treatments. The 881 collected embryoswere arranged as follows treatment 1 (control) 307 fresh embryos were cultured in vitro in PBSm + 0.4 percent BSA without beingexposed to either dehydration or cryoprotectants agents; treatment 2 292 embryos were loaded into 0.25 mL french strawscontaining 10 percent glycerol + 0.4 percent BSA in PBSm and after 10 minutes the straws were submitted to the rapid-freezing procedure(Biocool@, controlled freezer); treatment 3138 embryos were exposed during 2 minutes to a dehydration solution (10 percent ethyleneglycol + 6 percent BSA in PBSm) and then transferred to the vitrification solution (50 percent ethylene glycol + 6 percent BSA in PBSm) in teflon wirewith 0.4 mm diameter, 2cm length and 0.05 mm thickness containing the drop of 1 µL volume, and placed into stainless steelbox for the storage in LN2; treatment 4 144 embryos were exposed to a dehydration solution (10 percent éthylene glycol + 6 percent BSA inPBSm) and after 2 minutes were transferred to the teflon wire, that was previousily loaded with 1 µL of the vitrification solution (50 percent ethylene glycol + 6 percent BSA in PBSm). Finally, the teflon wires were placed into plastic globets attached to aluminum canesand maintained in LN2. After thawing, the embryos were serially washed in PBSm, and then cultured in PBSm supplementedwith 0.4 percent BSA. The hatched blastocyst rates observed in the treatments were T1 =79,80 percent (245/307); T2=40,07 percent (117/292);T3=39,13 percent (54/138) and T4=25,69 percent (37/144). In the second experiment, 747 embryos were arranged as follows treatment 1(control) consisted of 80 fresh embryos cultured in...