Uso do Sm14 recombinante (sm14r) na vacinação contra infecção experimental por Fasciola hepatica em coelhos / Use of recombinant Sm14 (rSm14) vaccination against experimental infection with Fasciola hepatica in rabbits

RESUMO

A proteína Sm14, Sm de Schistosoma mansoni e 14 representando o peso molecular aproximado em kDa, que pertence a família das proteínas que se ligam aos ácidos graxos (fatty acid binding proteins – FABP) é considerada um dos candidatos à vacina contra esquistossomose humana. Dado o grau de homologia entre a Sm14 e a Fh15 (fração de baixo peso molecular isolada da Fasciola hepatica), a sugestão lógica foi avaliar a eficácia imunogênica do antígeno recombinante, Sm14r, na infecção experimental por F. hepatica. Coelhos Nova Zelândia (NZ) foram imunizados com 80 microgramas do Sm14r e posteriormente desafiados com 40 metacercárias de F. hepatica. Foram utilizadas duas amostras do Sm14r sendo que o lote 1 foi expresso no vetor pRSET A (Sm14r – 1) e o lote 2 no vetor pAE (Sm14r – 2). As seqüências de aminoácidos dos lotes utilizados neste estudo possuem o aminoácido treonina na posição 20 (Sm14-T20). Os ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para detecção de anticorpos IgG contra os antígenos recombinantes revelaram que os grupos de animais imunizados com as proteínas associadas ao adjuvante (Sm14r – 1 + ACF e Sm14r – 2 + ACF) apresentaram níveis altos e significativos de anticorpos até o final do experimento. A produção de anticorpos anti-F. hepatica em coelhos NZ, experimentalmente infectados com esse trematódeo, foi acompanhada através da técnica de ELISA, utilizando o antígeno SOM (antígeno somático de vermes adultos de F. hepatica) e SE (extrato salino de F. hepatica). Anticorpos IgG anti-SOM e anti-SE foram detectados no período de 30 dias após a infecção. Paralelamente foram realizados exames coproparasitológicos individuais, sendo os primeiros ovos detectados nas fezes 90 dias após a infecção. Cento e trinta dias após a infecção, os animais foram necropsiados para contagem dos vermes de F. hepatica. Houve uma total correlação entre os níveis de anticorpos anti-SOM detectados por ELISA nos soros dos animais infectados, presença de ovos nas fezes, recuperação de vermes e danos hepáticos (através de análises macroscópica e microscópica). Com o objetivo de estudar o perfil imunofenotípico dos leucócitos circulantes do sangue periférico de coelhos imunizados e desafiados com metacercárias de F. hepatica (avaliação da resposta imune no contexto ex vivo) foram utilizados anticorpos monoclonais usados em ensaios de citometria de fluxo: CD4, CD8, CD44, CD18 e CD25. Os resultados permitiram observar que o protocolo vacinal onde houve associação das proteínas com o adjuvante favoreceu um maior número de alterações imunológicas. As proteínas Sm14r – 1 e Sm14r – 2 se mostraram antigênicas, mas no entanto, não foi possível avaliar a atividade protetora dos antígenos recombinantes através da redução da carga parasitária e danos hepáticos pela falta de viabilidade das metacercárias utilizadas neste estudo.