Identificação específica e filogenia de moluscos neotropicais do gênero Biomphalaria através de técnicas de biologia molecular / Specific identification and phylogeny of snails of the Neotropical genus Biomphalaria using techniques of molecular biology

RESUMO

A identificação morfológica dos moluscos do gênero Biomphalaria é dificultada, principalmente, pela semelhança e extensa variação intraespecífica observada nos caracteres morfológicos utilizados na identificação clássica desses moluscos. Com o objetivo de contornar esses problemas, introduzimos metodologias moleculares como ferramentas adicionais à identificação morfológica. A análise de polimorfismo de seqüência da região espaçadora interna (ITS1 + 5.8S + ITS2) do gene codificador do RNAr de Biomphalaria, amplificada através da PCR (reação em cadeia da polimerase) e posterior digestão com enzimas de restrição (RFLP-polimorfismos de tamanho de fragmentos de restrição) foi utilizada com sucesso na separação das 10 espécies de Biomphalaria existentes no Brasil e outras espécies desse gênero oriundas de outras localidades da América do Sul (Argentina, Uruguai, Paraguai, Venezuela) e Cuba. Utilizndo a PCR-RFLP, foi possível separar: 1) as 10 espécies e uma subespécie de moluscos brasileiros do gênero Biomphalaria; 2) espécies similares encontradas no Brasil, Argentina e Uruguai tais como: B. kuhniana, B. intermedia, B. straminea, B. tenagophila, B. occidentalis, B. t. guaibensis, B. oligoza, B. peregrina e B. orbignyi; 3) populações de B. havanensis de Cuba, B. obstructa obtidas de Cuba e República Dominicana e Isla del Carmem, México e, 4) caracterizar populações de B. prona obtidas do lago de Valência e dos arredores deste (Venezuela). Essa técnica mostrou-se uma ferramenta taxonômica importante, confirmando, na maioria dos casos, a sistemática morfológica clássica reforçando as relações de similaridade entre espécies do gênero Biomphalaria pela criação do complexo B. tenagophila e demonstrando a alta similaridade genética entre B. peregrina e B. oligoza. A análise das seqüências da região espaçadora interna ITS2 permitiu estimar as relações filogenéticas das espécies brasileiras do gênero Biomphalaria. Foram utilizados 3 diferentes métodos de inferência filogenética (neighbor-joining, parcimônia e maximum likelihood). Nossos resultados mostraram que a região ITS1 é muito variável e que ITS2 contém marcadores moleculares apropriados para a determinação das relações filogenéticas entre as espécies de Biomphalaria. As árvores filogenéticas obtidas com estes métodos apoiaram a sistemática atual baseada em dados morfológicos. Neste estudo moluscos do gênero Helisoma foram usados como outgroup.