Mantenimiento y titulación del virus de dengue para obtención de antígeno viral / Maintenance and titration of dengue virus for the obtainment of viral antigens

RESUMEN

El dengue es un grave problema de salud pública que no posee vacuna ni tratamiento específico. El método de diagnóstico más utilizado es el serológico, específicamente, la detección de anticuerpos IgM anti-dengue. Los antígenos virales utilizados en este método pueden ser preparados en cultivo de células de Aedes albopictus (C6/36). El objetivo de este trabajo fue el mantenimiento de los cuatro serotipos virales (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) en células C6/36 para la futura preparación de antígenos virales. Las células C6/36 fueron cultivadas en medio L-15 con 10% de SFB a 28ºC, e infectadas con 50 ml de cada uno de los serotipos virales por 5 a 7 días. Una vez confirmada la infección por inmunoflurescencia indirecta, los virus fueron titulados por la técnica de placa de lisis. Los títulos de los serotipos fueron D1 (RIO) (2,9 x 106 PFU/ml), D2 (RIO) (4,4 x107 PFU/ml), D3 (H87) (6,4 x 107 PFU/ml) y D4 (BV) (5,1 x106 PFU/ml). La producción de antígenos virales es de gran importancia dado que los mismos pueden ser utilizados en diversos métodos diagnósticos.

ABSTRACT

Dengue is a serious public health problem that has neither vaccine nor specific treatment. Serology is the most frequently used diagnosis method, specifically the anti-dengue IgM detection. The viral antigens employed in this method could be prepared from Aedes albopictus cell cultures (C6/36). The objective of this study was to maintain the four viral serotypes (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) on C6/36 cells for the preparation of viral antigen in the future. The C6/36 cells were cultured in L-15 medium supplemented with 10% FCS, infected with 50 µl of each viral serotype and then incubated for 5-7 days at 28°C. After confirmation of the infection by indirect immunofluorescence (IIF), viral titration was performed by lysis plaque assay. The serotypes titres obtained were as follows [2.9 x 106 PFU/ml] for D1 (RIO), (4.4 x107 PFU/ml) for D2 (RIO), (6.4 x 10 7 PFU/ml) for D3 (H87) and (5.1 x106 PFU/ml) for D4 (BV). The production of viral antigens is very important because they could be used in several diagnosis methods.