Quantificação de antígenos HLA classe I solúveis pela técnica de ELISA / Quantification of soluble HLA class I antigens by ELISA assay

RESUMO

As moléculas HLA (Human Leucocyte Antigens) são consideradas, principalmente, estruturas de superfície celular envolvidas em uma variedade de reações imunes associadas com transplante, infecções e doenças autoimunes. Os antígenos HLA também podem ser encontrados, em forma solúvel, no soro e em diferentes fluidos do organismo humano. Este trabalho teve como objetivo desenvolver a técnica imunoenzimática (ELISA) para quantificar os níveis séricos de antígenos HLA classe I, específicos e totais, em indivíduos normais e em pacientes renais. A técnica de ELISA foidesenvolvida para demonstrar a presença, no soro, de antígenos HLA classe I totais (sHLAI) e as especificidades HLA-A2 (sHLA-A2) e HLA-B7 (sHLA-B7). Oitenta e oito amostras de soro foram envolvidas neste estudo, sendo 61 amostras provenientes de indivíduos sadioscadastrados no Hemocentro Regional de Maringá, Estado do Paraná, e 27 pacientes renais, provenientes dos centros de diálise da cidade de Maringá, Estado do Paraná. As concentrações médias de sHLA para as especificidades -A2 e -B7, detectadas somente emindivíduos sadios, foram 504.06 ng mL-1 ± 142.10 e 427.33 ng mL-1 ± 140.73,respectivamente. Resultados preliminares mostraram que sHLA-I, em indivíduos sadios, foi de 253,77 ng mL-1 e, em indivíduos renais em diálise, de 381,67 ng mL-1. A técnica de ELISA para detecção de antígenos HLA solúveis poderá ser útil em estudos comparativos, em diferentes populações saudáveis, diferentes patologias e no monitoramento das rejeiçõe sem transplantes.

ABSTRACT

HLA (Human Leucocyte Antigens) molecules are regarded mainly as cell surface structures involved in several immune reactions associated with transplants, infections and auto-immunediseases. HLA antigens can be also found in soluble form in serum and in different fluids of the human body. The aim of this work was to develop the immunoenzymatic assay (ELISA) to quantify serum levels of specific and total soluble HLA class I antigens innormal individuals and in kidney patients. ELISA assay was developed to demonstrate the presence, in serum, of HLA-A2 (sHLA-A2), HLA-B7 (sHLA-B7) and total class I (sHLA-I) antigens. Eighty-eight serum samples were involved in this study, 61 from healthy individuals registered in the Regional Blood Center of the city of Maringá, Paraná State, and 27 kidney patients from dialysis centers of Maringá. The mean concentrations of sHLA-A2 and sHLA-B7, in healthy individuals, were respectively, 504.06 ng mL-1 ± 142.10and 427.33 ng mL-1 ± 140.73. Preliminary results showed that sHLA-I in healthy individuals was 253.77 ng mL-1, and 381.67 ng mL-1 in kidney dialysis patients. The ELISA assay couldbe useful to detect soluble HLA antigens in comparative studies in different healthy populations, in several pathologies and in monitoring rejection in transplantation.