Estabelecimento de ensaios in vitro para avaliação da resposta imune de cães a Leishmania chagasi / Establishment of in vitro tests to evaluate the immune response of dogs to Leishmania chagasi

RESUMO

A leishmaniose visceral (LV) é apontada como doença re-emergente e sua ascensão se relaciona com a ineficácia dos métodos de controle. Há evidências de que o cão é o principal reservatório da forma zoonótica da LV e que L. infantum/L. chagasi seja mantida em comunidades urbanas e peri-urbanas através de um ciclo cão-inseto-cão. Cães com leishmaniose visceral canina (LVC) exibem doença progressiva e geralmente fatal (cão susceptível ou sintomático) ou uma aparente resistência (cão assintomático). Animais doentes apresentam depressão das funções mediadas pelas células T. Em contraste, cães infectados e assintomáticos apresentam resistência ao parasito associada com uma resposta imune celular efetiva. A elucidação dos mecanismos que vão mediar a resposta imune na LVC pode auxiliar o desenvolvimento de vacinas ou estratégias de imunoterapia. O objetivo desta tese foi estabelecer dois ensaios in vitro. O primeiro ensaio foi estabelecido para avaliar se a resposta protetora à infecção por L. infantum/L. chagasi de cães imunizados e assintomáticos se reproduz num sistema de re-estimulação in vitro de PBMC. O segundo ensaio teve como objetivo estabelecer um sistema de estimulação primária in vitro (PIV), que consistiu em utilizar co-culturas de PBMC de cães sadios, previamente estimulados com promastigotas de L. infantum/L. chagasi, e macrófagos autólogos infectados. O primeiro ensaio mostrou que sobrenadantes de PBMC de cães assintomáticos são capazes de estimular macrófagos de cães normais a reduzir a infecção por L. chagasi. A detecção de IFN-y no sobrenadante de PBMC desses cães imunizados e re-estimulados in vitro com antígeno de L. infantum/L. chagasi foi associada à produção de NO pelos macrófagos caninos estimulados com sobrenadantes desses PBMC. O segundo ensaio estabelecido, um sistema de PIV, mostrou que a expressão de IFN-y e IL-4 pelos PBMC estimulados primariamente in vitro com L. infantum/L. chagasi apresenta uma correlação negativa com a infecção. O aumento da expressão dessas citocinas pelos PBMC estimulados primariamente com L. infantum/L. chagasi durante seis dias e co-cultivadas com macrófagos está correlacionado a uma diminuição do percentual de macrófagos infectados. A expressão de IL-1O desses PBMC foi variável e não pôde ser correlacionada à infecção. Esse é o primeiro relato de um sistema de PIV com PBMC e macrófagos caninos infectados por L. infantum/1. chagasi. Esse ensaio, utilizando cães não expostos ao parasito, permitiu discriminar in vitro a resposta de macrófagos a L. infantum/L. chagasi. Os dois ensaios estabelecidos poderão ser utilizados como testes para predizer a resposta do cão à infecção ou na avaliação de candidatos vacinais contra a LVC.