Padronização de dosagem de produto de degradação fibrinogênio/fibrina humano / Human fibrin/fibrinogen degradation product dosage standardization

RESUMO

A hemostasia contribui para integridade e fluidez sanguinea. Após ativação de plaquetas, fatores da coagulação e células endoteliais ocorrem reações enzimáticas gerando trombina e fibrina, principal constituinte do trombo. A plasmina remove o coágulo degradando a fibrina em produtos solúveis (sistema fibrinolítico) e fragmentados (Produtos de Degradação da Fibrina - PDF) onde o Dímero D é o mais estável. Por isso torna-se um importante indicador do risco vascular. Realizaram-se 2 protocolos LAMB F (Fibrinogênio) e Lamb D (Fragmentado D) produzindo 2786 hibridos com atividade anti PDF. Os hibridos selecionados foram submetidos à técnica de immunoblotting onde foram utilizadas as fontes de antigenos diferentes (Fib comercial, Fib purificado in house, Fragmento D, líquido de drenagem rico em PDF. Com base no reconhecimento das frações protéicas, selecionou-se 2 híbridos (LAMB F1 - 120 e LAMB D3-6), que foram clonados e expandidos em cultura (in vitro) e ascite (in vivo) para obtenção de altas concentrações de AcMm. O líquido ascítico foi purificado (coluna de afinidade)e os anticorpos acoplados em esferas (beads) de agarose. Testes qualitativos foram realizados em paralelo com o produto comercial (Dimer Test Dade Behring) utilizando 20 amostras de pacientes (15 PDF normal e 05 PDF alterado). Os resultados mostraram 100% de concordância entre o produto comercial e os anticorpos anti-PDF produzido no laboratório.