Recuperação autóloga de sangue intra-operatória: validação com marcador tumoral específico em câncer de próstata / Intraoperative Autologous Blood Recovery: validation with a specific tumour marker in prostate cancer

RESUMO

INTRODUÇÃO: Padrões de metilação aberrante em amostras de DNA de pacientes com câncer são marcadores moleculares sensíveis. A hipermetilação na região promotora de GSTP-1 está presente em mais de 90% dos pacientes com câncer de próstata e pode ser avaliada através de técnicas de PCR. A recuperação autóloga intra-operatória durante cirurgia oncológica não tem sido recomendada devido ao risco de células tumorais estarem circulantes neste sangue. Nosso objetivo é demonstrar que o sangue recuperado de cirurgia oncológica pode estar livre de células tumorais após a utilização de filtros para remoção de leucócitos e irradiação, através da hipermetilação do promotor de GSTP-1 como marcador. MÉTODOS: Realizamos recuperação autóloga intraoperatória em prostatectomia radical sem a reinfusão do sangue. Somente os casos com hipermetilação do promotor de GSTP-1 nas amostras de tumor fresco foram incluídas. Uma amostra de sangue periférico foi colhida na indução anestésica. O sangue recuperado foi colhido ao longo da cirurgia e então submetido à lavagem; filtração e irradiação (25 Gy). As amostras foram estudadas em cada etapa para detectar a presença de células de tumor de próstata contaminantes, através de ensaios qualitativos e de “real time” PCR metilação específica. RESULTADOS: Detectamos células de tumor de próstata no sangue recuperado através da presença de metilação para GSTP-1 nos ensaios de PCR qualitativos. Após filtração e irradiação as análises de “real time” PCR confirmaram a ausência de metilação, sugerindo a ausência de células viáveis. DISCUSSÃO Utilizando uma abordagem epigenética não evidenciamos célula tumoral viável ou DNA no sangue recuperado desses pacientes após filtração e irradiação. Esses resultados apontam para a segurança da recuperação de sangue associando filtração e irradiação em cirurgia oncológica...

ABSTRACT

INTRODUCTION: Aberrant DNA methylation patterns provide a powerful sensitive detection molecular marker to cancer. GSTP-1 hypermethylation is present in more than 90% of prostate cancer patients and can be measured by PCR-based techniques. Blood salvage during cancer surgery is limited due to the potential presence of circulating tumour cells. We aimed to show that intraoperative salvaged blood can be freed of tumour cells after leucodepletion filters and irradiation of washed blood using GSTP-1 hypermethylation as a biomarker. METHODS: We performed intraoperative blood recovery in radical prostatectomy without reinfusion. Only cases with GSTP-1 hypermethylation in the fresh tumour samples were included. A peripheral blood sample was collected during anaesthesia induction. Salvaged blood was collected throughout the surgery and then submitted to washing, leukoreduction and irradiation. Samples were studied stepwise for the presence of prostate tumour cell contamination using qualitative and realtime methylation specific PCR. RESULTS: Prostate tumour cells detected by positive results for GSTP-1 in washed salvaged blood became negative after filtration and irradiation in qualitative PCR. It was confirmed by quantitative assay, thus suggesting the absence of viable cells. DISCUSSION: Using an epigenetic approach no tumour viable cell or DNA was found in the salvaged blood of these patients after filtration and irradiation (25Gy). These results point to the safety of blood salvage with filtration and irradiation in cancer surgery (AU)