Análise da expressão gênica de proteínas associadas à coagulação sanguínea na neoplasia maligna de esôfago / Analysis of gene expression of proteins associated with blood coagulation in malignant esophageal neoplasm

RESUMO

Estudos recentes indicam que o fator tecidual (TF) participa no crescimento tumoral, metástase e angiogênese através de uma via independente da coagulação sanguínea. A superexpressão do TF em células tumorais contribui para o estado pró-trombótico em pacientes com câncer. Adicionalmente, uma família de receptores acoplados à proteína G, conhecidos como receptores ativados por proteases (PARs), tem sido associada à biologia do tumor. Estes receptores podem ser ativados por proteases da coagulação como a trombina, o fator VIIa (FVIIa) e o fator FXa (FXa), mediando assim a sinalização celular e podendo levar a um aumento da expressão de IL-8 em vários tipos celulares. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão do RNAm de TF, PAR-1, PAR-2 e IL-8 em pacientes com câncer de esôfago. Amostras de tecidos foram obtidas de 35 pacientes submetidos a esofagectomia ou endoscopia em 3 hospitais das regiões Sul e Sudeste do Brasil Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE-UERJ), na cidade do Rio de Janeiro, Hospital de Clínicas (HCPA-UFRGS), na cidade de Porto Alegre - Rio Grande do Sul e o Hospital de Clínicas - Gastrocentro (HC-UNICAMP), na cidade de Campinas - São Paulo. Amostras de tecido esofágico tumoral e da mucosa normal adjacente ao tumor, foram obtidas de cada paciente e o diagnóstico foi confirmado através da análise histopatológica do tecido adjacente. O RNA total foi então extraído e analisado por transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) e por PCR em tempo real (qPCR). Nossos resultados demonstraram um aumento significativo, nas amostras tumorais quando comparadas as amostras normais, da expressão de TF (4,2 +- 5,3, SE=0,9), PAR-1 (6,1 +- 4,7, SE=0,9) e IL-8 (18,2 +- 14,4, SE=3,9), o mesmo porém não foi encontrado para o PAR-2 (1,6 +- 0,8, SE=0,2). Nossos dados sugerem que TF, PAR-1 e IL-8 podem ter um importante papel na biologia dos tumores de esôfago. Na busca por esclarecimentos de como as proteínas analisadas...

ABSTRACT

A number of studies indicate that Tissue Factor (TF) might participate in tumor growth, metastasis and angiogenesis through a pathway that is independet of blood coagulation. TF overexpression by tumor cells contributes to a pro-thrombotic status in cancer patients. Also, a family of G protein-coupled receptors known as protease-activated receptors (PARs) has been implicated in tumor biology. These receptors may be activated by blood coagulation proteases including thrombin, FVIIa and FXa, thus eliciting cell signalling which might lead to interleukin-8 (IL-8) expression by a variety of cells. The aim of this study was to compare the expression of TF, PAR-1, PAR-2 and IL-8 mRNAs in patients with esophageal cancer. Tissue samples were obtained from 35 patients submitted to esophagectomy or endoscopy in three hospitals from south and southeast regions of Brazil Hospital Universitário Pedro Esnesto (HUPE-UERJ), located at Rio de Janeiro, Hospital de Clínicas (HCPA-UFRGS), located at Porto Alegre, Rio Grande do Sul, and Hospital de Clínicas - Gastrocentro (HC-UNICAMP), located at Campinas, São Paulo. Tumor samples and the corresponding normal mucosa were obtained from each patient and the diagnosis was confirmed by histopathological analysis of adjacent tissues. Total RNA was extracted and further analyzed by reverse transcriptase (RT)-PCR and Real Time PCR. Our results showed a significant increased expression of TF (4,2 +- 5,3, SE=0,9), PAR-1 (6,1 +- 4,7, SE=0,9) and IL-8 (18,2 +- 14,4, SE=3,9) in tumor samples, but not of PAR-2 (1,6 +- 0,8, SE=0,2). Our data indicate that TF, PAR-1 and IL-8 might play an important role in esophageal cancer. To analyze the role of this proteins in oesophageal cancer patients, we used "in vitro" models with TE-1 cell line. Our results demonstrated that TE-1 cells express TF, PAR-1 and PAR-2 and display potent procoagulant activity. In this context, we will further investigate whether the activation of PAR receptors induces...