Introdução da reação em cadeia da polimerase em tempo real no algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 / Use of the real-time polymerase chain reaction in the HTLV-1 and HTLV-2 infections diagnostic testing algorithm

RESUMO

Em vista das dificuldades encontradas no diagnóstico de infecção por vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) no Instituto Adolfo Lutz (IAL) de São Paulo, foi proposto o presente estudo que objetivou avaliar o valor do cut-off dos testes de triagem sorológica e os algoritmos de testes laboratoriais, dando ênfase ao emprego da reação em cadeia da polimerase (PCR) como teste confirmatório. Do total de 3.271 amostras de sangue provenientes da rotina diagnóstica dos anos de 1998 a 2010 (a) 2.312 amostras de soro (1998-2006) foram empregadas para estabelecer o melhor valor de cut-off para os ensaios imunoenzimáticos (EIAs) usando a análise ROC (receiving operating characteristics); (b) 313 amostras de sangue (2009) foram analisadas por algoritmo de duas coletas seqüências de sangue; (c) 73/959 amostras de sangue reagentes na triagem sorológica (2007-2010) foram empregadas no estudo comparativo de sensibilidade e custo dos testes confirmatórios de Western blot (WB), PCR convencional (tax e pol) e PCR em tempo real (pol). As PCRs foram otimizadas usando DNA extraído de linhagens celulares infectadas por HTLV-1 (C91-PL) e por HTLV-2 (BBF) e realizada pesquisa de gene da albumina humana como controle endógeno. Os resultados da análise ROC mostraram que um ajuste no valor do cut-off dos EIAs de 3ª geração aumentou a especificidade desses ensaios em 7,8%, sem alterar significativamente a sua sensibilidade. O algoritmo de coleta seqüencial de sangue se mostrou inadequado sendo mais apropriada a coleta única em tubo contendo anticoagulante. Os resultados do ensaio confirmatório de WB mostraram que este foi mais sensível (90,56%) do que a PCR convencional (77,36%) e a PCR em tempo real (79,25%), provavelmente pela pequena carga proviral de HTLV-1 e HTLV-2 presente no sangue, principalmente de portadores assintomáticos. Todavia, as técnicas de PCR se mostraram úteis na elucidação de amostras com padrão indeterminado à...